미생물학실험 레포트 PCR, Agarose gel, 전기영동3

소개

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목차

1. Title
2. Date
3. Purpose
4. Principle
5. Materials
6. Method
7. Result
8. Discussion
9. Referernces

본문내용

Purpose PCR,Agarose gel 만들기, DNA의 전기영동 과정을 이해한다.
(전기영동의 의미를 이해하고 DNA의 크기 및 구조에 따른 결과차이를 이해한다.
Agarose gel에 DNA와 loading dye를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기에 다라 다르므로 매질 내에서 종류에 따라 분리하게 되며 전기영동은 DNA의 크기에 따른 분리를 한다.)

Principle
• PCR의 원리
중합효소 연쇄반응법(PCR :Polymerase Chain Reaction)은 게놈 DNA에서 특정한 부분만을 시험관 내에서 선택적으로 복제하고 증폭할 수 있는 간편하고 신속한 방법이다. PCR을 위해서는 증폭될 핵산과 증폭의 시발점이 되는 두개의 시발체(primer)가 있어야 한다. 여기에 추가적으로 적당한 dNTPs와 증폭에 적당한 조건 및 증폭을 시행할 수 있는 폴리머라제(polymerase)가 있어야 핵산의 증폭이 가능하게 된다. 그러나 성공적인 PCR이 되려면 적합한 primer를 제작하는 일이 무엇보다도 중요하다.

(1) PCR의 원리
첫 단계는 이중쇄 DNA를 단일쇄 DNA로 열변성(denaturation)시킨다.
두 번째 단계는 올리고 뉴클레오티드를 단일쇄 DNA에 결합(annealing)시킨다.
세 번째 단계는 결합한 올리고뉴클레오티드를 primer로 하여 DNA 폴리머라제에 의해 DNA를 합성(Extension)하여 이상의 과정을 일정한 싸이클동안 반복한다.

이론적으로 매 PCR 주기마다 증폭되는 DNA는 2배씩 늘어나야 하나 (n 싸이클 후는 2n개) 여러 가지 이유에서 일정 주기가 지나면 증폭되는 DNA의 양이 안정기(plateau)에 도달하게 된다. PCR로 증폭된 밴드를 에티디움 브로마이드(EtBr)로 염색된 아가로스 젤(Agarose gel)에서 관찰하려면 약 50ng의 DNA가 필요한데 50ng은 300bp길이 DNA로 따지면 약 1011카피가 된다.

참고자료

· http://blog.naver.com/injun81?Redirect=Log&logNo=100132422757
· http://xerxgus.blog.me/70019747092
· http://healthinformatics.wikispa
· ces.com/Electrophoresis
· http://if-blog.tistory.com/722
· http://nanomate.blog.me/110004733820
· http://en.wikipedia.org/wiki/TAE_buffer
· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=296421&cid=558&categoryId=558
· 1 Biology 2권, 박선우, 피엠디아카데미, 2014년 12월 254~274,330~337