PCR

소개글

PCR(Polymerase Chain Reaction)

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
처음 실험에서 추출한 Plasmid DNA를 이용해 DNA변성, Primer결합, DNA신장의 cycle을 25~35회 반복 진행하여 Target DNA를 증폭시켜 그 DNA의 크기를 전기영동으로 확인하는 실험이다. PCR은 Polymerase Chain Reaction으로 중합효소 연쇄반응이다. 시약을 pfu master fix 25㎕, Nuclear free water 12.5㎕, Forward primer(T7 primer) 10㎕, Reverse primer(T7 terminator primer) 0.5㎕ 순서로 차례대로 넣은후 마지막에 저번실험의 Plasmid DNA를 2㎕를 넣고 총 50㎕의 용액을 만들었다. 그후 PCR을 진행한 후 전기영동하여 결과를 얻었다.

2. Experiment
<PCR>
그림 1. PCR PCR이란 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction)으로 현재 유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에 사용하고 있는 검사법으로, 검출을 원하는 특정 표정 유전물질을 증폭하는 방법이다. DNA염기를 하나하나 복제하여 여러가득을 만드는 것으로 아주 적은 양의 DNA로 많은 양의 DNA를 얻을 수 있다. 크게 Denaturation, Annealing, Extenstion(Polymerization) 세 가지로 이루어져있다. 이 일련의 세 단계를 30~40회 정도 반복한다. 여기서 Denaturation은 Double Strand의 형태의 DNA에 90~95도 가량의 높은 온도로 15~30초간 처리하게 되면 각각 하나의 Single strand DNA로 분리되어 새로운 DNA를 합성하는데 주형가닥으로써 작용한다. Annealing은 Tm(melting temperature)에서 Template DNA와 Primer의 annealing이다. Tm는 DNA와 Primer가 잘 붙을 수 있는 온도이다.

참고 자료

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2019 생물화학공학 이론 및 실험 실험노트
pET-22b(t)b Vector protocol