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미생물 접종 배양: plate 접종법, serial dilution, 균수 측정, 활성 검사(API 20NE test, API ZYM test)

*효*
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최초 등록일
2019.04.12
최종 저작일
2018.09
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목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Results
5. Discussion
6. Conclusion
7. References

본문내용

Abstract
LB Agar plate와 broth를 만들어 Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptococcus pyogenes를 접종하고 serial dilution으로 Escherichia coli의 수를 측정한다. Chryseobacterium rhizosphaerae가 urease, b-glucosidase, protease의 활성을 갖고 glucose, mannose, gluconate, malate를 이용해 동화작용을 할 수 있는 균주라는 것을 API 20NE test를 통해 알 수 있다. 그리고 Bacillus subtilis가 alkaline phosphatase, esterase lipase, acid phospatase, α-glucosidase의 활성을 갖는 균주라는 것을 API ZYM test를 통해서 알 수 있다.

Introduction
미생물은 바이오산업에서 다방면으로 활용되고 있고 사용의 목적에 따라 여러 방식으로 배양이 된다. 실험실에서는 주로 LB plate와 LB broth를 제조해서 실험한다. LB plate와 LB broth는 제조하는 방법이 쉽고 복합배지로 대부분의 미생물이 잘 자란다. 실험에 세균이 사용하는 경우 신뢰도를 높이기 위해 하나의 균주만을 이용하는 것이 바람직하다. 그래서 주로 streaking을 통해서 균을 순수 분리한 후 순수 배양을 해 single colony를 얻는다. LB plate의 경우 colony의 수, 성장하는 정도, colony의 색이나 형태 등을 broth의 경우 혼탁한 정도로 균의 성장을 눈으로 확인할 수 있다. 하지만 균의 수가 많고 사이즈가 매우 작기 때문에 수를 헤아리는 것은 매우 어렵다. 그래서 serial dilution을 통해서 균을 희석한 시료 속에 균의 농도를 낮추어 배양한 후 colony가 30~300개가 되면 수를 세어 CFU를 통해 희석 전 시료의 세균의 수를 계산한다.

참고 자료

James H. Jorgensen, John D. Turnidge(2015), Susceptibility Test Methods: Dilution and Disk Diffusion Methods, Manual of Clinical Microbiology, Eleventh Edition
VIRTANEN, S.(1960), A Study of Nitrate Reduction by Myco-bacteria, Acta Tuberculosea Scandinavica
Gerard M. Lehrer, Leonard Ornstein(1959), A Diazo Coupling Method for the Electron Microscopic Localization of Cholinesterase, Journal of Cell Biology
*효*
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