[미생물실험]Recovery and digestion of the amplified DNA

소개

[미생물실험]Recovery and digestion of the amplified DNA
PCR에서 증폭한 DNA를 회수 및 분해해보는 실험레포트입니다.
예비실험 보고서입니다.
결과 및 토의 내용은 저의 예상된 소견이라 실험 결과는 없습니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
1.1. PCR로 증폭된 DNA를 회수하여 절단한다. 그로 인해 형질전환 때, vector을 넣을 DNA를 얻고, 절단하여 vector를 넣고자 함이다. 이 때, vector DNA와 insert DNA 모두 같은 효소로 같은 위치를 절단하고자 한다.

2. 실험 이론 및 원리
2.1. 중합효소연쇄반응(PCR)법
소량의 DNA를 대량으로 증폭시키는 방법으로 과학수사나, 유물발굴현장에서 DNA감정을 할 경우 소량의 DNA로는 보다 정확한 측정이 불가능 할 뿐 더러, 여러 번 실험이 불가능해 실험의 정확성을 떨어뜨린다. 따라서 많은 DNA를 증식하기 위해 중합효소연쇄반응(PCR)법을 이용한다. PCR은 아무리 적은양이든, 질이 나쁘든 간에 DNA를 다량으로 증폭 시킬 수 있다는 장점이 있다. PCR(polymerase chain reaction)은 시험관 내에서 DNA를 복제하는 효소로 하여금 연쇄 반응을 일으키게 하여 20cycle 반응 만에 한 개의 DNA helix를 백만 배로 증폭시켜 주는 획기적인 실험 기법이다. PCR의 원리는 극히 단순하고, 쉽게 응용할 수 있기 때문에 순수 분자생물학 분야 이외에도 의학, 이학, 농학, 수의학, 시품과학, 환경과학 뿐만 아니라 고고학이나 인류학에 이르는 분야까지 그 활용범위를 넓혀하고 있다. PCR덕택에 우리는 cloning을 하지 않고도 유전자를 물리화학적으로 분석하고 sequencing도 할 수 있게 되었다. 이 실험 기법은 1980년대 중반 미국 Cetus사의 Mulis 박사가 개발하였는데, 처음에는 E.coli의 DNA Polymerase를 매 cycle 마다 heat denaturation 후 새로 첨가해 주어야 했다. 그러나 높은 온도에서 자라는 미생물인 Thermus aquaticus(Taq) polymerase가 94℃에서도 활성이 상당히 유지된다는 사실의 발견과 함께 그 효소의 정제가 가능해짐에 따라 이 효소를 이용하여 PCR실험을 간편히 할 수 있게 되었다.

참고자료

· 분자세포생물학, 아카데미, 박상대
· cell and molecular biology, gerald karp