pcr[polymerase chain reaction] 실험 과목 레포트 A+

소개

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목차

1. Nested PCR
2. Inverse PCR
3. RT-PCR
4. Asymmetric PCR
5. Q-PCR (Quantitative PCR, Real-time PCR)
6. Touchdown PCR
7. Colony PCR
8. Long Accurate PCR
9. Hot start PCR
10. Multiplex PCR
11. RAPD PCR (Random Amplified Polymorphic DNA PCR)
12. Competitive PCR
13. RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)
14. ISPCR(in situ PCR)
15. DDRT-PCR(Differential Display Reverse Transcriptase-PCR)

본문내용

PCR은 중합효소 연쇄반응이라고도 한다. 2개의 primer사이에 낀 DNA부분을 시험관내에서 대량으로 증폭시키는 방법으로 K.B.Mullis가 고안했다. DNA합성효소(DNA polymerase)가 DNA합성에 primer를 필요로 하는 데, 이 primer에서 5′→3′방향으로 DNA가 합성하는 것을 이용하여, 첫 번째에는 DNA의 외가닥에의 변성 다음으로 primer의 결합 세 번째로 중합효소에 의한 상보성DNA의 합성 회로를 반복하는 것으로서 목적인 유전자 영역만을 시험관내에서 증식시킨다. 따라서 PCR에 의해 미량인 DNA시료에서 목적인 특정영역의 DNA를 20만~50만 배로 증폭시킬 수 있다. 계산상 10cycle을 수행하면 목적하는 DNA의 사슬 수는 약 1000배로 증폭된다. 1회의 cycle이 약 2분이므로 단시간에 증폭이 가능하다. 증폭 가능한 DNA의 길이는 일반적으로 수백 염기쌍인데 2~3kb까지도 증폭이 가능하다.
PCR에는 여러 종류가 있다.

1. Nested PCR : Nested PCR은 의도되지 않은 primer의 binding site의 증폭으로 인해서 오염되는 것을 방지하기 위해 고안된 PCR방법이다. 이를 위해서 1회cycle에서 산물을 희석하여 template으로 사용한다.또 2세트의 primer가 사용되는데, 2차 primer는 첫 번째product를 증폭하기 위한 것이다.

2. Inverse PCR :기존에 알고 있는 서열이 내부에 있고 양 옆으로 알지 못하는 서열이 있는 경우에 사용되는 PCR의 방법이다. 제한효소로 DNA를 자른 후에 self ligation을 시킨다. 원으로 만들어진 target DNA에 알고 있는 서열에 대한 primer를 붙인 후에 PCR을 통해서 증폭한다. 이름처럼 기존의 PCR방향과 반대 방향으로 진행된다.

참고자료

· 없음