단백질 정량(Biuret method) 실험 report

목차

1. 실험 목적
2. 재료 및 방법
3. 실험 결과
4. 고찰
5. 결론
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적 : biuret 방법으로 standard curve를 만든다. 그런 다음 standard curve를 바탕으로 미지의 시료의 단백질 농도를 알아본다. 실험을 통해 biuret 방법을 정확히 숙지하고 원리를 제대로 파악한다.

biuret 반응이란? 두 개 이상의 펩타이드 결합을 가진 단백질에서 나타나는 반응으로서 단백질과 CuSO4를 반응시키면 단백질이 Cu2+와 결합하여 화합물을 형성한다. 이 반응은 펩타이드 결합에 아래와 같은 착염을 형성함으로써 정색반응이 나타나는데, 단백질의 분자량이 커질수록 적자색에서 청자색을 띄게 된다. 이 반응은 2개 이상의 -CONH2(peptide bond)를 가진 화합물에 일어나는 반응이기 때문에 유리아미노산이나 dipeptide일 때는 이 반응이 일어나지 않는다. 단백질은 peptide를 다수 가지고 (출처 : 기본 식품 분석학 p333, 채수규 저, 석학당, 2013) 있으므로 반응이 나타난다.(출처 : new 식품분석 제 2 개정판 p89~90, 금종화 외 8명 저, 지구문화사, 2013) 이 방법은 Kjeldahl 방법보다 경제적이고 신속하며 간단하게 분석할 수 있는 방법으로 Lowry 방법, 자외선 흡수법, 혼탁도를 이용하는 방법보다도 색소성분에 의한 영향이 적고 측정에 영향을 미치는 물질이 비교적 적다. 그러나 Lowry 방법보다는 감도가 떨어지며 적어도 2~4mg이 있어야 측정이 가능하다. 고농도의 암모늄염이 존재하면 반응에 영향을 미치며 단백질의 종류에 따라 색깔이 약간 변한다. 많은 양의 지방이나 탄수화물이 있으면 불투명해지기도 하며 알려진 단백질에 의해 색이 표준화되어야 하는 단점을 안고 있다. (출처 : 식품 분석학 p94, 노봉수 외 4명 저, 수학사. 2008) 정리하자면, Biuret법이란 단백질 측정에 가장 일반적이며 대표적인 방법으로, 단백질의 peptide 결합과 알칼리성 유액 중의 Cu2+가 반응하여 형성된 자색(뷰렛반응)의 킬레이트 복합체(chelate complex)를 540nm에서 비색 측정하는 방법이다.

참고자료

· 기본 식품 분석학 p333, 채수규 저, 석학당, 2013
· new 식품분석 제 2 개정판 p89~90, 금종화 외 8명 저, 지구문화사, 2013
· 식품 분석학 p94~95, 노봉수 외 4명 저, 수학사. 2008
· 실무를 위한 식품분석학 - 표준곡선 작성법, 노봉수 외 4명 저, 수학사, 2014
· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1059530&cid=40942&categoryId=32212 두산백과 - 결정계수
· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=151315&cid=50331&categoryId=5033농업용어사전 - 소혈청알부민
· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1087202&cid=40942&categoryId=32227 두산백과 - 람베르트- 베르의 법칙