단백질 정량 분석 예비레포트

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2020.09.27
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목차

1. 실험 목적
2. 바탕 이론
3. 실험 기기 및 시약
4. 실험 방법
5. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적

① UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등의 단백질 정량 분석 방법에 대해 이해한다.

② Lowry method를 이용해 여러 가지 농도의 단백질 시료를 정량 분석한다.

③ UV/Vis spectrophotometer의 이용 방법을 알고 이를 이용해 단백질 용액의 흡광도를 측정한다. 측정한 흡광도를 바탕으로 단백질의 농도 별 흡광도를 나타내는 BSA 검량곡선을 그려보고, 이를 이용해 미지 농도의 단백질 시료의 농도를 구한다.

2. 바탕 이론

(1) 단백질 정량 분석

단백질 정량이란 시료 내에 포함되어 있는 단백질의 양이나 농도를 구하는 과정으로 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등의 방법들로 구할 수 있다. 단백질 정량법은 단백질의 종류와 반응 용액의 pH 등의 요소에 따라 적절하게 선택해서 사용할 수 있다.

① UV법 (Spectrometric method)

방향족 아미노산인 Phenylalanine, Tyrosine, Tryptophan에 의해 280nm에서 최대 흡광을 이용하는 방법이다. 흡광도는 농도에 비례한다는 Lambert-Beer law 를 이용하는 방법으로 Phenylalanine, Tyrosine, Tryptophan는 280nm의 자외선을 흡수하기 때문에 280nm 파장에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하다. 빠른 시간 내로 측정이 가능하며 측정 과정에서 단백질이 변성되지 않으므로 측정 이후에도 재사용이 가능하다. 정확한 양 보다는 상대적인 양이나 존재 유무를 확인하는데 사용되며 각 단백질들의 아미노산 조성에 따라 그 값이 달라질 수 있다는 단점이 있다.

② Lowry법

일반적으로 가장 널리 사용되는 단백질 정량법이다. 알칼리 조건하에서 이온이 단백질의 펩타이드 결합(peptide bonds) 과 결합하여 복합체(complex) 를 형성하고 가 로 환원된다. 이 상태에서 Folin&Ciocalteu's 시약이 첨가되면 이온에 의해 노란색의 시약이 청색으로 환원된다. Folin&Ciocalteu's 시약은 phosphomolybdate와 phosphotungstate의 혼합물이다.

참고 자료

안전보건공단 화학물질정보, www.msds.kosha.or.kr
사이언스올, https://www.scienceall.com
“2019 2학기 화공기초이론및실험2 실험노트”
김해신, 2014, “생화학 실험서 제2판”, 월드사이언스, p.45~48
조봉희 외2명, “UV-분광광도법과 전기영동에 의한 피마자 유식물에서 저온처리에 의한 당류 함량과 단백질 구성의 분석”, 분석화학, p.3~4, (1995)
안소연, "BSA 분리에 대한 정밀 여과막 오염 특성", 서울과학기술대 학위논문, p.41~42 (2006)

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