[분자세포생물학] Polymerase chain reaction(PCR) & blotting

목차

1. Introduction
2. Materials
3. Methods
4. Result
5. Discussion

본문내용

․ PCR & blotting
시험관에서 DNA 사슬을 복제하는데 최초의 효소는 DNA polymerase Ⅰ(DNA Pol Ⅰ)으로 디옥시 뉴클레오티드를 DNA사슬에 연결시켜주는 가장 중요한 중합효소로 10여년간 믿어져 왔다.
그러나 1967년 어떤 E.coli 돌연변이체에서는 DNA Pol Ⅰ이 거의 정상 속도로 DNA를 합성할 수 없다는 것이 발견되었다.
그리고 1년 내에 두 개의 또 다른 DNA 중합효소가 발견되었는데 이 중에는 대부분의 DNA사슬을 신장시키는 DNA PolⅢ가 있다.
DNA 이중나선은 서로 반대쪽으로(5‘→3’, 3‘→5’)배열되어 있으며, 그들의 딸나선은 서로 반대쪽으로 합성되어지기 때문에 실질적으로 DNA 복제는 대단히 복잡하다.
이러한 기술적 집약을 바탕으로 PCR(Polymerase chain reaction)이라는 기법이 탄생하게 되었다. PCR은 비교적 새로운 기술인대, 매우 간단하면서 감도가 높고 응용범위가 넓어 현대 생명과학에서 가장 중요한 Teachnology 중의 하나로 자리 잡고 있다.
PCR은 DNA 중합효소의 반응 즉 DNA 복제가 연쇄적으로 일어나는 반응이다.
그러나 세포에서의 복제같이 염색체가 전부 복제되는 것은 아니고 좁은 장소, 한 군데 정해진 곳에서만 일어난다. 그 결과 하나의 출발 DNA 단편 분자로부터 수백 만개로 복사하여 증폭 시킴으로써 많은 양의 순수한 시료를 얻을 뿐 아니라 유전자 분리를 위한 다양한 접근 방법을 제공한다.
현재 PCR은 미량의 DNA로부터 DNA의 증폭, 미량의 mRNA로부터 cDNA합성, DNA sequencing, 유전자 결함이나 유전자서열의 다양성 검사 등에서 매우 활발하게 이용되고 있다.

※ PCR의 이용
‣ genomic DNA나 Chromosomal DNA로부터 직접 클로닝
‣ in vitro에서 mutagenesis나 DNA의 조작
‣ forensic sample의 genetuc fingerprinting
‣ 감염물질 존재여부의 확인
‣ genetic disease의 prenatal diagnosis

참고자료

· T.A brown, PCR 실험노트, 월드사이언스, 2004,
· 강종백, 유전자 크로닝 입문, 탐구당, 2004,
· 카지이메이지, 신분자유전학, 신일상사, 2001,