A+실험보고서- DNA전기영동-Agarose gel 만들기 및 DNA electrophoresis

소개글

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목차

1. Title

2. Date

3. Name

4. Purpose

5. Materials

6. Methods

7. result

8. Discussion

9. Projects
1) PCR(Polymerase Chain Reaction)에 대해 간단히 조사하여 쓰고, Tm (melting temperature)의 의미에 대해서 조사하시오.
2) DNA 전기영동의 원리와 특성에 대해서 조사하세요.
3) loading dye의 역할에 대해서 조사하세요.
4) EtBr이 무엇인지 조사하세요. (전기영동에서의 역할, toxic한 이유)

본문내용

1. Title : Agarose gel 만들기 및 DNA electrophoresis
2. Date :
3. Name:
4. Purpose: 전기영동의 의미를 이해하고 DNA의 크기 및 구조에 따른 결과 차이를 이해한다. Agarose gel에 DNA와 loading dye를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기에 다라 다르므로 매질 내에서 종류에 따라 분리하게 되며 전기영동은 DNA의 크기에 따른 분리를 한다.
5. Materials: PCR product, 6X dye, TAE buffer, micro pipette, tip, tank, agarose, EtBr, steriler, magnetic bar, 플라스크, DW, 1X TAE buffer, size marker.

6. Methods
< Agarose gel 만들기 >  위험할 수도 있어서 생략! (조교님께서 미리 만들어 오셨다.)
① 1× TAE 용액으로 희석하여 350㎖에 3.5g을 섞어서 1%로 만든다.
② 전자레인지를 사용하여 열을 가해서 완전 용해시킨다. (or magnetic bar 와 steriler를 이용하여 녹인다.)
③ 뜨거운 것을 약간 식힌 후 틀에 부어준다.
④ 바를 끼워준다.
⑤ 완전하게 굳으면 틀에서 떼어내고 1× TAE 용액에 담궈 보관한다.

<전기영동 내리기> (각 조에서 한 명씩만 진행 하였음)
① gel에 ladder(2㎖) 와 loading dye+DNA(1㎖)를 주입한다.
(+증류수 3㎖)
② 전기를 50mV-100mV를 걸어준다 (135v로 진행하였다!)  35분
③ DNA를 확인한다.

참고 자료

전기영동 최신 프로토콜/ 강호일/ 월드사이언스/ p26-28, p29-33
식품과학기술대사전/한국식품과학회/광일문화사/2008
전기 영동, 아가로 오스 및 아크릴 아마이드 젤. Methods Enzymol /Ogden, RC, and Adams,DA/1987/p 61-87
표준 DNA 전기 이동 법을 위한 전도성 매체의 역사 그리고 원리/ Anal Biochem. Brody, JR,Kern, SE/2004/p33
중합효소 연쇄 반응(PCR)
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=927698&cid=51007&categoryId=51007
고리 열림DNA
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1061622&cid=40942&categoryId=32326
선형 DNA
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=428915&cid=60261&categoryId=60261
초나선 DNA
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5141474&cid=60266&categoryId=60266
아가로스 겔(Agarose gel)
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=4353235&cid=40942&categoryId=32308