Polymerase chain reaction (PCR) 실험보고서

최초 등록일
2016.01.29
최종 저작일
2015.06
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목차

1) 실험 결과
2) 토의
3) Further Study
4) 참고문헌

본문내용

1) 실험 결과
실험 결과를 보면, 1, 2, 3, 4조 레인 모두에서 가장 진한 band의 위치가 마커의 550bp(base pair 수)를 갖는 DNA 조각 band의 위치와 비슷하고, 이중 1, 2, 3조 레인에서는 이보다 더 큰 bp를 갖는 DNA 조각의 band도 나타났다. 이외의 나머지 레인은 DNA에 의한 band가 희미하거나 나타나지 않았다.

<그 림>

2) 토의
tube에 넣는 10x buffer는 1x로 10배 희석해서 사용해야 하므로, 전체 부피는 buffer 부피의 10배인 50μl가 되도록 DW의 양을 맞춘다. 여기서 buffer는 PCR이 일어나기 좋은 환경을 만들어 Taq polymerase의 효소활성을 촉진시키고, primer의 annealing을 돕는다.
PCR protocol에서 처음에 온도를 95°C까지 높여주는 것은 DNA를 고온에서 변성시켜, 이중가닥을 단일가닥으로 분리시키는 denaturation을 위한 단계이다. 다음으로 annealing하는 단계는 primer가 DNA의 target gene의 양 끝에 가서 결합하는 단계이고, extension하는 단계는 Taq polymerase의 최적 활성 온도인 72°C를 구현하여 이 효소에 의해 DNA 합성이 일어나는 단계이다. 이후 전기영동을 통해 원하는 크기의 DNA를 얻었는지 확인해 보았다.
실험 결과, target gene은 550bp를 갖는 DNA 조각으로 추정된다. 1, 2, 3, 4조 모든 레인에서 550bp에 가장 진한 band가 형성되는 결과를 보였다. 하지만 이 레인들 중 다른 bp를 갖는 DNA band도 희미하게 관찰되었다. 또한 우리 조의 경우 550bp 이외의 곳에서는 band가 관찰되지 않았다. 여기서 target gene 이외의 DNA band가 나타난 이유는 primer가 주형가닥에 붙을 때, target gene의 양끝이 아닌 다른 곳에 붙어 복제가 일어나서 target gene보다 더 긴 DNA 조각을 얻었기 때문일 수도 있다. target gene 이외의 위치에 DNA sequence가 비슷해서 primer가 종종 붙는 부위가 있을 수 있다.

참고 자료

미생물학 실험서/ 한국미생물학회편/ 을유문화사
최신실험 미생물학/ 미생물 및 면역학 분과회/ 신일상사
미생물 실험서/ 유민, 김병오, 이혜영 공저/ 보문각
유전학 실험/ 한국 유전학회/ 아카데미 서적
분자생물학/ 심웅섭 외/ 월드사이언스
PCR 실험의 원리와 응용/ 최용락, 정수열, 이영춘 역/ 세종출판사

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