[분자유전학] Gel electrophoresis (전기영동)

목차

I. Introduction
II. Material
III. Method
IV. Result
V. Discussion

본문내용

I. Introduction
Electrophoresis of DNA는 알고자 하는 DNA band를 gel에 넣고 전기를 흘려주어 확인하는 방법이다. 원심분리 방법은 비용이 비싸고, 분리의 시간이 오래 걸리며 또한 10,000Da이하의 작은 분자는 침전시킬 수 없다. 이를 보완한 방법이 전기영동법이다. 이 방법은 원심력 대신 전기장을 이용하는 방법으로 단순한 기기와 저렴함, 그리고 단백질로부터 뉴클레오티드 한 분자까지 정확하고 신속하게 분리할 수 있는 장점이 있다. DNA의 두 사슬은 당과 인산이 번갈아 연결되어 만들어진다. DNA의 인산은 하나의 음전하를 띄고 있으며 수 천 개의 염기가 연결된 DNA절편은 그만큼의 음전하를 띈다. 따라서 전기장이 걸리면 DNA는 양극으로 끌리는데 그 이동속도는 전압, 매질의 종류, DNA분자의 크기와 모양 등에 의해 결정된다. 전기영동은 전기장에서 분자가 매질을 통과하게 하여 물질을 분리하는 방법이다. 핵산의 전기영동에 주로 쓰이는 매질은 agarose이다.

<중략>

Methods
Agarose gel의 %에 맞춰서 agarose 분말을 재고, TBE buffer에 섞는다.
(1% agarose gel)
Agarose 분말이 잘 녹지 않기 때문에 끓여주면서 투명해질 때까지 녹인다.
투명해지면 굳기 전에 Etidium Bromide(EtBr)을 1 μl 정도 넣고 살살 섞는다.
(EtBr은 강력한 발암물질이기 때문에 주의해서 사용한다.)
어느 정도 식으면 gel cast에 well을 만드는 comb을 꽂고 공기방울이 생기지 않도록 주의해서 붓는다.
Gel이 잘 굳도록 식혀주고 굳으면 well이 잘생겼는지 확인해본다.
잘 만들어졌으면 well에 DNA와 gel loading buffer를 섞은 sample을 주입한다.
Electrophoresis가 잘 되었는지 확인한다.

참고자료

· 정병준, 분자세포생물학, 아카데미서적, 2001,
· 이귀영, 전기영동, 의학문화사, 2002,
· 장호남, 생물화학공학, 방한출판사, 1997,
· 레닌저, 기초생화학, 월드사이언스, 1999,
· 경희대학교 생물학과, 한양대학교 생물학과 교수진, 일반생물학 실험, 이퍼블릭 코리아, 2010,