[생물학실험보고서] 배지만들기 및 colony dilution

소개

배지에 콜로니를 희석하여 콜로니의 개수를 직접확인하고 계산하여 본다. 항생제에 저항성을 지니는 균을 구별해 내는 실험.
serial dilution에 대한 조사와 항생재 종류와 역할에 대한 조사도 포함되어 있다.

목차

1. Title
2. Date
3. Name
4. Purpose
5. Meterials
6. Methods
7. Results
8. Discussion
9. Projects
10. Reference

본문내용

1. Title : 배지만들기 및 colony dilution
2. Date :
3. Name :
4. Purpose : 배지에 colony를 희석하여 colony의 개수를 직접확인하고 계산하여 본다. 항생제에 저항성을 지니는 균을 구별해 낸다.

5. Materials : 액체 LB배지, round bottom tube, shaking incubator, 고체 LB배지, LB(Amp)배지, Ecoli(DH5α), 균A, 균B, ep-tube, pipette, tip, vortex, 네임펜

6. Methods
< colony dilution >
① round-bottom tube에 LB 3mL을 넣고 single colony(DH5α)를 섞어준다.
② shaking incubaton에 250rpm에 37℃ 15시간 돌려준다.
③ 1.5ml tube에 균(DH5α) 100㎕를 넣는다.
④ 3개의 1.5ml tube에 LB 900㎕를 넣는다.
⑤ 1/10으로 dilution하여 넣는다. (1/10, 1/100, 1/1000)
⑥ 살짝 vortexing한다.
⑦ 고체배지에 100㎕씩 접종하여 spreading한다.
⑧ 37℃ incubation에 18h 배양한다.
⑨ 다음날 colony를 관찰한다.

<중 략>

8. Discussion
콜로니가 거의 관찰되지 않았던 지난 실험에 비해 다수의 콜로니가 관찰된 성공적인 실험이었다. 같은 도말평판법을 썼었고, 방법에도 큰 차이가 없었던 것으로 미루어 보아 세균 배양액의 차이가 결과의 차이를 만들었던 것으로 추론할 수 있다. 성공적인 실험을 위한 바람직한 배양액의 농도에 대해 궁금증이 생겼다.
배지에 스프레딩을 할 당시 가장 고민이 되었던 것은 유리봉이 제대로 식었는지 여부였다. 10주차 실험에서 유리봉이 제대로 식지 않은 상태에서 도말을 해서 실험이 실패했을 수도 있다는 인식이 있어서, 11주차 실험에서는 지나치게 오래 기다린 경향이 있었고 실험 시간이 길어지는 등의 불편이 있었다.

참고자료

· 환경학도를 위한 미생물학 4장 원핵성 생장 동력학
· 항생물질이야기 - 스튜어트 B.레비 ‘항생제의 종류’