면역형광염색

목차

1. 실험목적
2. 결과
3. 문제
4. 고찰

본문내용

1. 실험목적
mouse유래의 C2 cell line의 근원세포(myoblast)와 근관세포(myotube)의 세포골격을 Immunostaining(면역형광염색, Immunocytochemistry)을 사용하여 관찰하고 세포핵을 대조 염색하여 면역형광염색의 원리와 실험방법을 숙지하며, 관찰결과를 통해 myoblast와 myotube가 가지는 특징과 차이에 대하여 이해한다. 실험에 사용되는 면역형광염색의 원리와 형광현미경의 원리를 이해한다.

<중 략>

2. 실험을 통하여 얻은 결과
이번 실험에서 사용한 세포는 지난 실험에서 사용했던 세포와 동일한 C2 cell line의 myoblast와 myotube이다. myoblast를 Rhodamine-phalloidin을 사용하여 세포골격을 염색하고, 그 후 대조염색으로 Hoeschst33258을 사용하여 세포핵을 염색했다. Rhodamine-phalloidin에 의해 세포질의 F-actin을 염색하는데, 그 결과 세포의 microfilament(미세섬유 혹은 actinfilament라고도 한다)을 주황색의 형광으로 염색할 수 있었다. Hoeschst33258을 사용한 대조염색에서는 세포핵을 푸른색의 형광으로 염색할 수 있었는데, 지난 시간에 Hematoxylin을 사용하여 염색했을 때보다 세포를 훨씬 용이하게 관찰할 수 있었다. 세포가 융합되어 있는 것인지 개개의 세포가 분리되어 있는 것인지는 사진 상으로는 확인하는 것이 어렵지만 일부 분리된 세포에서 microfilament의 배열이 연결되어 있거나 비슷한 양상을 보이는 것으로부터 유추해볼 수 있다.
면역형광염색을 통해 관찰한 myotube는 지난 시간에 hematoxylin을 통해 관찰한 것과 큰 차이가 있었다. hematoxlyin염색의 경우 세포를 관찰 할 때 세포핵 외에도 비특이적(non-specific)인 결합으로 인해 다른 구조물(예를 들어 세포질에 존재하는 염기성아미노산)이 염색되기도 하고 잔류하는 염료에 의해 세포질이 염색되면서 세포의 관찰에 있어 많은 어려움이 있었다.

참고자료

· 정해문 외 3명, 발생생물학의 이해, 교학사, 2002, p400~402
· Scott F Gilbert, 발생생물학 제7판, 강해묵 역, 라이프사이언스, 2004, pp273~274
· Janeway 외 3명, 면역생물학 제6판, 라이프사이언스, 김선영 외 역, 2005, pp556~55
· Peter Parham, 면역학 3판, 라이프사이언스, 서영훈 외 역, 2011, pp94~96
· 한국정보통신기술협회 TTA용어검색(공초점레이저현미경), http://www.tta.or.kr/
· Wikipedia – The free Encyclopedia (Epitope, Protein structure prediction),
· Takara Korea Biomedical Inc, 면역염색법, http://cms.takara.co.kr/file/lsnb/28_h_1.pdf