단백질 분리정제 및 기능 분석(Column Chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase분리)

소개

Column Chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리하는 단백질 분리정제 및 기능 분석 실험 후 제출한 만점 레포트 입니다.

목차

1. 주제

2. 목표

3. 서론
1. Column Chromatography의 원리
2. Ion-exchange Chromatography

4. 본론
1. 실험도구
2. 실험방법

5. 결론

6. Discussion

Reference

본문내용

주제 : 단백질 분리정제 및 기능 분석
목표 : Column Chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리한다.

서론
Column Chromatography의 원리 :
칼럼크로마토그래피의 일반적인 조작은 일단 칼럼을 만든다음 시료용액을 흐르게 하여 각 성분을 층상으로 놓이게 한다음 용매를 흐르게하여 층상의 성분을 완전하게 분리시키고 이 조작을 계속하여 칼럼으로부터 순차적으로 흘러나오는 각 성분을 나누어 크로마토그래피를 얻는 것이다. 원리는 고정상과 이동상에 대해서 어떤 것에 대한 affinity가 더 높으냐에 대한 것이다. 즉, 친소관계에 대한 분리이다. 이것을 Partition theory라고 부른다. Column안에 있는 Bead 가 고정상이고, Buffer가 이동상이 된다. 칼럼크로마토그래피의 과정 중 처음 PM(protein mixture)을 넣었을 때 내려오는 것을 FT(flow through)라고 하는데 여기에는 분리 시키고 싶은 AP가 있어서는 안된다. 여기서 AP는 당연히 없어야 하는 물질이기 때문에 이것을 negative control 이라고 부른다. 당연히 있어야 하는 물질은 positive control 이라고 부른다

<중 략>

오늘 실험에서는 AP(Alkaline Phosphatase)를 '분리' 하였다. 여러가지 물질들을 놓고 각각 물질의 성질의 다름을 이용해 분리하는 실험을 하였다. 보통 분리할때는 크기, 소수성, 전하 등 여러가지 요소를 이용해 분리하는데, 이번 실험에서는 전하(charge)를 이용하였다. 양극과 음극의 affinity와repulsion을 이용하였다. 이것이 ion-exchange chromatography에 대한 것이다. 오늘은 resin으로 DEAE를 사용했는데 DEAE는 양극을 가지고 있다. DEAE를 이용하면 column을 통하여 양극을 띈 물질이 나온다. 그러므로 DEAE는 anion exchanger이고 오늘 anion exchange matrix(양극이 음극을 끌어당기는 것)를 이용했다. 오늘 실험중에 Bead slurry를 사용했는데 Bead slurry란 버퍼와 비드가 1대1로 동일한 양으로 있는 것을 말한다.

참고자료

· http://en.wikipedia.org/wiki/Ion_chromatography, 2015-03-20
· http://www.separations.us.tosohbioscience.com/ServiceSupport/TechSupport/ResourceCenter/PrinciplesofChromatography/IonExchange, 2015-03-20
· https://www.youtube.com/watch?v=q3fMqgT1do8, 2015-03-20
· http://www.bio-rad.com/en-us/applications-technologies/liquid-chromatography-principles/ion-exchange-chromatography, 2015-03-20
· http://wolfson.huji.ac.il/purification/PDF/IonExchange/AMERSHAM_iIEXandChromatofocManual.pdf, 2015-03-20
· http://www.gelifesciences.com/webapp/wcs/stores/servlet/catalog/ko/GELifeSciences/products/ion-exchange-chromatography-iex/, 2015-03-20
· http://www.proteinchemist.com/tutorial/iec.html, 2015-03