생화학실험 세번째. PCR2

소개

건국대학교 생화학실험 PCR (중합효소연쇄반응)
primer/ template DNA
과정, 결과, 고찰, 참고사항, 주의사항

목차

1. 실험일자
2. 실험제목
3. 실험목적
4. 실험원리
5. 실험재료
6. 실험과정
7. 실험결과
8. 고찰
9. Question & Answer

본문내용

1.실험일자 : 2014년 11월 11일 화요일
2.실험제목 : 중합효소 연쇄 반응
3.실험목적 : PCR의 원리를 이해함으로써 DNA 복제과정을 이해하고 특정 DNA를 증폭한다.
4.실험원리 :
1) PCR이란?
1983년 Kary mullis 박사에 의해 고안된 DNA 증폭 기술, 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관 내에서 원하는 DNA분자를 증폭시키는 방법으로 짧은 시간에 적은 양의 DNA로도 많은 양의 DNA합성이 가능하다. 이를 통해 in vitro 상에서 특정 부위의 DNA를 105~108배까지 수 시간 내에 증폭시킬 수 있으며, 이렇게 증폭된 DNA를 여러가지 실험에 이용할 수 있고 실험 결과를 토대로 여러 의학적인 연구에 응용할 수 있다.
PCR에 필요한 요소로는 주형 DNA( template), 프라이머(primer), dNTP, taq polymerase, 보조요소(cofactor ex. MgCl2)등이 있다. 주형 DNA는 증폭 대상이 되는 DNA로서 염기서열의 일부를 알고 있어야 한다. 프라이머는 증폭할 부분을 잡는 짧은 염기서열로 주형 DNA의 양쪽 끝에 있는 염기서열과 상보적인 단일 가닥의 DNA이다. dNTP는 유전자를 합성하는 재료가 되는 각 뉴클레오티드 염기들로써 dATP, dCTP, dGTP, dTTP 등이 이에 해당된다. Taq polymerase는 온천에 서식하는 미생물에서 추출한 열에 특별히 강한 유전자 합성 효소이다.
2) PCR의 3단계
(1) DNA의 변성 (denaturation) : 이중가닥 DNA가 단일가닥 DNA로 분리되는 단계
90~96도로 가열하여 이중가닥 DNA를 단일가닥 DNA로 분리시킨다. 높은 온도일수록 단일가닥으로 잘 이행되지만 Taq polymerase 역시 온도가 아주 높은 상태에서는 활성이 낮아질수 있으므로 보통 94도로 한다. 첫 cycle에서는 확실한 변성을 위해 약 5분간 지속시킨다.

참고자료

· 일반생물학실험 /한양대학교 출판부/한양대학교 분자생명과학부
· 생명과학실험 / 동아대학교 / 김민주 등
· 생물학 실험서 / 예스북 /전북대학교 자연과학대학
· 일반생물학실험/ 지코사이언스
· 식물세포의 DNA 추출 :
· http://blog.cyworld.com/nlsee01/5165520
· http://www.dbpia.co.kr/Journal/ArticleDetail/482350
· PCR-http://www.happycampus.com/doc/11272289/?agent_type=naver
· PCr:http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1116&docId=57529432&qb=UENSIFRt&enc=utf8&section=kin&rank=1&search_sort=0&spq=0&pid=S5ijplpySo8ssv8BDNRsssssssw-061869&sid=VJZapgpyVo8AAD8jdjY
· http://blog.naver.com/shinchon2002/205132909