생물학실험2 PCR 보고서

소개글

경북대 생물학실험2 PCR 실험보고서.
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목차

1. DNA 추출과정을 정리하고, 추출에 사용된 시약의 특징 및 기능을 설명하라.
2. 제한효소의 특징과 기능
3. PCR 원리
4. Agarose 전기영동의 원리와 DNA의 이동에 영향을 미치는 요인
5. 전기영동 후 DNA의 사진과 sample간 DNA loading 형태가 다른 이유.
6. Real-time PCR
7. 참고 문헌 및 사이트

본문내용

1. DNA 추출과정을 정리하고, 추출에 사용된 시약의 특징 및 기능을 설명하라.
1) DNA 추출과정
(1) 브로콜리 잎 끝 부분을 1g 정량한 후 막자사발에 담고, PA buffer 6500ul와 RNase A 10ul를 넣은 후, 막자를 이용해 브로콜리를 곱게 간다.
(조원이 5명이라서, 브로콜리 0.2gX5, PA buffer 600ulX10+여분 500ul, RNase A 2ulX5)

(2) 브로콜리 cell lysate를 600ul씩 각자 microtube에 담는다.

(3) 3. 60℃에 5분간 incubation, 온도를 유지하면서 inverting 및 약한 vortexing을 5분간 지속적으로 해준다.

(4) 원심분리(13000rpm, 7min) 후 상층액을 500ul씩 브로콜리 입자가 섞여 들어가지 않게 깨끗하게 따내어 spin Column으로 옮긴다.

(5) 원심분리를 12000rpm으로 1min간 실시한다.

(6) Column을 빠져나온 액은 버리고, Column에 Washing buffer 1을 600ul 넣는다.

(7) 원심분리를 12000rpm으로 1min간 실시한다.

(8) Column을 빠져나온 액은 버리고, Column에 Washing buffer 2을 600ul 넣는다.

(9) 원심분리를 12000rpm으로 1min간 실시한다.

(10) Column을 빠져나온 액은 버리고, Column의 아래쪽 tube를 다시 장착 후, 한 번 더 원심분리를 12000rpm으로 1min간 실시한다.

참고 자료

http://agelf.blog.me/140186206569
필수 세포생물학 4판, Alberts, Bray, Hopkin, Johnson, Lewis, Raff, Roberts, Walter, 2016년 2월 29일 인쇄, p339.
Biology 2nd 이론편, 박선우, 2016년 1월 12일 인쇄, p153, 315, 320, 364, 369, 384.
http://blog.naver.com/didwns1027/140012497300