RT-PCR (Real time PCR)

목차

Ⅰ. 원리
① TaqMan probe법
② Interchelating법
③ Molecular beacon법
④ Cycling probe법

Ⅱ. 실험 방법

Ⅲ. 실험 결과 및 고찰

본문내용

Ⅰ. 원리

Real-time PCR

Real time PCR에 의한 정량은 PCR 증폭산물을 실시간으로 모니터링 하여 증폭이 일어나는 영역에서 발생하는 형광신호 강도를 측정하여 얻을 수 있다. DNA가 2(n=cycle)의 배율로 증가한다는 증폭속도 이론을 기초로 하기 때문에 더욱 더 정확한 정량이 가능하다. 위의 표는 실제 DNA농도와 형광신호로 검출되는 증폭곡선을 나타낸 것이다. PCR이 진행되면서 1주기마다 DNA가 지수적으로 증폭되다가 Plateau(평탄역)에 도달한다. PCR 증폭산물이 형광으로 검출할 수 있는 한계가 존재하기 때문에 그 양에 다다를 때까지는 증폭곡선에는 변화가 없다. 초기 DNA량이 많을수록 증폭 산물량이 검출 가능한 양으로 증폭될 때까지의 시간이 짧아지므로 증폭곡선(붉은색)이 빨리 나타나게 된다.

단계적으로 희석한 표준시료를 가지고 Real time PCR 반응을 하면 초기 DNA양이 많은 순서대로 일정한 간격으로 늘어선 그래프를 얻을 수 있다. 이를 이용하여 기기가 검출할 수 있는 한계선과 곡선이 교차하는 지점을 Ct(Cycle threshold)로 정의할 수 있다. Real time PCR을 통해 얻어진 Ct값을 비교하면 미지의 시료에 대해서도 초기 DNA의 양을 계산할 수 있다.

참고자료

· 없음