Nissle staining

목차

1. 실험제목
2. 실험날짜
3. 실험 목적
4. 실험 준비물
5. 실험 방법
6. 실험 내용 및 결과
7. 토의

본문내용

- 실험목적
◆ 관류 고정하는 과정과 Crosyl violet solution을 이용해 살아 있는 세포를 고정한 후 얇은 절편을 만든 후, 염색하여 조직을 관찰할 수 있다.

- 실험 준비물
Saline solution, 4% PFA , mouse brain, 30% Sucrose solution, 동결절편기, tube, Dry ice, Methanol(Ethanol), 붓, PBS, Slide glass, Cover glass, 트랜스퍼피펫, 100% Ethanol, 95% Ethanol, Distilled water, 비커, 0.1% Crosyl Violet solution, Oven, 0.1% AAG, Staining jar, 현미경

- 실험 방법
◆ Nissle 염색 ◆
1. 관찰할 조직을 4% PFA 으로 Fixation 과정을 해준다.
ex) 심장
➀ 우심실을 cut
➁ 좌측 심장을 잘라 Saline을 관류.
➂ 2분정도 피를 빼고 4% PFA 으로 5~6분 정도 관류.
➃ 30% Sucrose solution에 담가서 overnight.
2. 30% Sucrose solution이 담긴 tube에서 mouse brain을 꺼내 어느 정도 알맞은 크기로 잘라준다.
3. 동결절편기에 Dry ice와 Methanol(Ethanol)을 넣어준 뒤 mouse brain을 cooling 한다.
4. mouse brain을 30μm의 두께로 자른 뒤 붓으로 조직을 채취해서 PBS에 넣어준다.
5. 30μm의 두께로 자른 mouse brain 조직을 1~2편정도 Slide glass에 붓을 이용해서 얇게 펴준다.
6. Slide glass에서 떨어지지 않기 위해 Oven에서 30분~1시간 말려준다.
7. 100% Ethanol을 담은 Staining jar에 Slide glass를 5분 동안 담가 놓는다.

참고자료

· 없음