Specific activity and enzyme kinetics of alkaline phosphatase

소개

높은 성적을 받았던 리포트입니다.

목차

1. 주제

2. 목표

3. principle

4. Materials and equipment
1) Colorimetric determination of AP activity
2) Specific activity of Enzyme
3) 효소반응론

5. Methods

6. Observation and results

7. Discussion

8. References

본문내용

1. 실험 날짜

2. 주제 : Specific activity and enzyme kinetics of alkaline phosphatase

3. 목표 : 효소의 활성도를 흡광도를 이용하여 측정하는 방법과, specifiv activit의 개념을 이해하고, enzyme kinetics에서 기본이 되는 M-M equation과 Linear-burk equation을 이용행서 효소활성의 척도가 되는 Km, Vmax, kcat 등을 실험적으로 측정한다.

4. Principle
1) Colorimetric determination of AP activity

Alkaline phosphatase는 dimer로 존재하는 효소로서 monomer로서 83kDa의 분자량을 지니는 단백질이다. AP는 여러 가지 phophoester 화합물을 가수분해하여 무기인산을 생성시키는 특징을 가지고 있다.
이번 실험에 쓰일 기질은 para-nitrophenyl phosphate(PNPP)로 이는 색깔이 없는 물질이나 가수분해 시, 진한 황색을 띠는 PNP(para-nitro phenol)가 생성된다. PNPP와 AP를 상온에서 10분간 반응시키면 PNP가 생성되는데, PNP는 405nm영역에서 흡광을 나타내므로 이 파장에서의 흡광도를 측정함으로써 AP의 activity를 측정해낼 수 있다.

2) Specific activity of Enzyme
단위 질량 당 효소의 활성을 말하며, 효소활성을 단백질의 단위중량당으로 나타낸 것. 일반적으로 활성의 단위는 비 〔U/mg〕로 나타낸다. 효소 이외의 불순한 단백질이 적을수록 비활성이 높아지기 때문에 효소정제의 척도가 된다.
효소의 정제 순도가 높을수록 specific activity가 증가한다.

3) 효소반응론
효소는 대부분 단백질로 구성되어 있으며 때때로 보조인자를 필요로 하는 효소도 존재한다. 보조인자(cofactor)는 금속이온이나 보조효소(coenzyme)일 수 있다.
효소의 반응은 michaelis-mentens equation을 통해 구할 수 있는데, 이 때 kcat/Km의 의미는 매우 중요하다.

참고자료

· 레닌저 생화학, David L. Nelson&Michael M.Cox, 2010년, 5판, pp. 198-203
· http://elchem.kaist.ac.kr/vt/chem-ed/sep/extract/partitn.htm (2014. 05.03)
· http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=289672 (2014. 05.03)
· http://www.intechopen.com/books/progress-in-molecular-and-environmental-bioengineering-from-analysis-and-modeling-to-technology-applications/isolation-and-purification-of-bioactive-proteins-from-bovine-colostrum (2014. 05.04)
· http://blog.naver.com/lovecat2010?Redirect=Log&logNo=10077967362 (2014.05.06)
· http://blog.naver.com/withcoffee67?Redirect=Log&logNo=70155445176 (2014. 05.06)
· http://blog.daum.net/cdnews/13747600 (2014.05.07)