Bradford method를 이용한 단백질 정량. 건국대. 생명공학 실험 예비 및 결과

목차

1. 실험 목적
2. 이론
3. 실험 기구 및 장치
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 결과 분석
7. 건의 사항
8. 참고 문헌

본문내용

Bradford Protein Assay를 이용해서 특정 단백질을 정량할 수 있다.

2. 이론
산성 조건하에서 Coomassie Brillant Blue G-250이 단백질과 결합하여 붉은 색이 푸른색으로 변하고 최대 흡수파장이 495nm에서 595nm로 옮겨지는 것을 이용하여 단백질의 농도를 정량하는 방법이다. 이 방법은 2분 안에 측정이 끝나므로 매우 신속한 방법으로 재현성이 높고 감도가 Lowry방법에 비하여 매우 높다. 또한 안정성이 1시간까지 유지된다. , , , , polyphenol, 환원당 등에 영향을 받지 않으며, 4000dalton 이상의 펩티드나 단백질은 모두 측정할 수 있다. 비이온성 세척제(Triton X-100), sodium dodecyl sulfate 등에 영향을 받으나 그 양이 0.1% 이내이면 무난하다. 석영큐벳과 반응하기 때문에 유리 또는 플라스틱 큐벳을 사용해야 하며 단백질의 종류에 따라 표준검량곡선이 약간 달라질 수 있으므로 검량곡선의 표준물질을 선택하는 것이 매우 중요하다.

3. 실험 기구 및 장치
시험관, 증류수, Spectrophotometer, cuvette, test tube, rack, micro pipet, 단백질 표준용액 - Bovine gamma globulin(또는 Bovine serum albumin) 0.1mg/ml, Bradford 염료 시약 (Coomassie Brilliant Blue G-250 dye, phosphoric acid, methanol의 혼합물)

4. 실험 방법
ⅰ) 실험 시
⓵ 5X의 Protein assay dye를 증류수를 이용하여 1X로 묽힌다. (조별로 50㎖씩 준비)
⓶ 10㎎/㎖ albumin solution 1㎖를 만든다.
⓷ ⓶에서 만든 albumin solution을 이용하여 0.0㎎/㎖, 0.2㎎/㎖, 0.4㎎/㎖, 0.6㎎/㎖, 0.8㎎/㎖ abumin solution을 각각 1ml씩 만든다.

참고 자료

안용근 / 효소 단백질 정제법 / 양서각 / 1994 / p63~70
이근보 외 2명. 식품분석. 유한문화사. 2002. p139~154
강국희 외 3명. 식품분석학. 성균관대출판부. 1998. p129~141