분자유전실험 - cloning(insert&vector 준비)

목차

I. Abstract

II. Introduction
1. HSP17.7 Cloning 실험에 대한 개요
2. PCR의 주의사항

III. Material & Methods

IV. Results
1. 각 조별 PCR 결과를 비교하시오.
2. 각 조별 plasmid extraction 결과를 비교하시오.
3. Restriction enzyme 처리 전, 후의 PCR 산물과 plasmid를 비교하여라.

V. Discussion
1. PCR을 수행한 결과 insert product의 농도가 낮을 경우 어떻게 PCR 조건을 조절하여야 하는지 설명 하시오.
2. 실험 결과 해석 (Description)
3. Cloning Vector의 기능과 종류

본문내용

I. Abstract

이번 실험의 목표는 유전자 Cloning의 과정을 위한 초기 단계에 해당되는 Insert Gene(DcHSP17.7 gene)의 PCR을 통한 증폭과 Vector(pET11a)의 Extraction을 수행하고 각각에 대해 제한효소를 처리하는 과정까지 수행하는 것이다. 그래서 Insert gene의 PCR 결과와 Vector의 Extraction 결과를 조별로 gel상에 전기 영동하여 관찰하였다. 그리고 각각 제한효소 처리 전과 후를 비교하였다. 실험 결과, 모든 조에서 삽입유전자는 예상대로 원하는 위치에 band가 나타나 있는 것을 볼 수 있었고 PCR을 통해 증폭이 잘 일어나 있었다. 마찬가지로 모든 조에서 Plasmid 또한 환형 DNA의 특성에 맞게 모양마다 band가 다양한 위치에 골고루 나타나 있었고 축출이 잘 된 것을 확인할 수 있었다. 그리고 제한효소 처리 전과 후를 비교했을 때, Insert gene은 제한효소 처리 후 band의 size가 미세하게 작아진 것을 관찰할 수 있었고 Plasmid dna의 경우 제한효소 처리 후 환형 dna에서 선형 dna로 모양이 바뀐 것을 band의 개수를 보고 판단 할 수 있었으며 예상하는 위치에 vector(pET11a)의 size와 대략 비슷하게 band가 나타난 것을 확인 할 수 있었다. 이 실험을 통해 추후 진행 될 Cloning 실험 과정 중 다음 단계에 해당되는 Ligation 과정을 수행하기에 적합한 실험이 수행되었다고 볼 수 있다.

<중 략>

1. HSP17.7 Cloning 실험에 대한 개요

이번 실험은 추후의 cloning을 위한 첫 단계로 ① insert 유전자인 hsp17.7 gene(열충격 단백질 유전자)을 원하는 특정 부분만 증폭하여 얻을 수 있는 실험 방법인 PCR을 통하여 다량 얻고, vector인 pET11a 플라스미드를 항생제 내성 박테리아로부터 DNA extraction 하여 얻은 뒤 각각 동일한 제한효소를 처리하여 삽입하기 전까지 수행하는 것이다.

참고자료

· 없음