콩과식물과 근권과의 공생관계연구

목차

1. 콩과식물의 중요성

2. 모델 콩과식물로서 M. truncatula

3. Medicago truncatula의 생물학적 특징

4. M. truncatula 연구를 위한 도구들

5. M. truncatula와 다른 콩과식물 간의 비교 유전체학

6. M. truncatula 유전체의 유전자 분포 분석

7. 실험방법
1) BAC library의 탐색 과정1
2) BAC library의 탐색 과정2
(1) Multiplex PCR 전략
(2) Multiplex pooling
3) BAC library의 탐색 과정3

8. Full-length cDNA의 응용

9. 실험 과정

10. CAP trapper 방법을 이용한 full-length cDNA 합성

본문내용

1. 콩과식물의 중요성
· Rhizobia와 공생관계를 형성하여 대기 중의 질소를 고정
· 농업적, 경제적인 면에서 중요한 가치
- 많은 양의 단백질 함유
- 식량 및 사료의 중요한 자원
- 인류가 섭취하는 단백질량의 33% 차지

2. 모델 콩과식물로서 M. truncatula
· 대부분의 콩과작물은 유전체가 크고 구조가 복잡하며 형질전환이 잘 되지 않음
· 식물에서는 최초로 전체 염기서열이 밝혀진 Arabidopsis thaliana는 박테리아나 균류와 공생관계를 형성하지 못함
· M. truncatula를 미생물-식물간 상호작용의 분자적 기작을 이해하기 위한 모델식물로 채택

3. Medicago truncatula의 생물학적 특징
· 일년생, 자가수정, 짧은 세대주기
· 2배수체(n=8)
· 비교적 작은 유전체(500Mbp)
· Alfalfa, pea와 유사한 유전자 구조
· 질소고정
· 콩과식물의 생물학 연구를 위한 모델 식물

<중 략>

7. 실험방법
3) BAC library의 탐색 과정3
· Multiplex PCR
1) gDNA test
제작된 primer(EST)가 gDNA와 제대로 반응하는지 확인하는 과정, PCR수행 후 전기영동하여 양성반응을 나타낸 primer만 다음 탐색실험에 사용.
2) 1차 탐색
특정 EST와 반응하는 후보지역을 탐색하는 과정, 24개의 primary pool(24X576 BAC 클론)을 주형으로 특정 primer sets와 PCR
3) Multiplex pool을 이용한 2차 탐색
후보지역내 특정 EST와 반응하는 BAC을 탐색하는 과정. 1차 탐색에서 양성반응을 보인 primary pool을 multiplex pooling하여 10rows&10columns로 재배열한 후 특정 primer sets와 PCR
4) 3차 탐색
2차 탐색을 검증하는 단계, 2차 탐색에서 양성반응을 나타낸 단일 BAC 클론을 주형으로 하여 colony PCR

참고자료

· 없음