[생화학실험] Lac z gene 분리,친화크로마토그래피,Bradord method를 이용한 단백질(효소,lac z gene)의 정제 및 정량

목차

1. 실험 날짜
2. 실험 제목 및 목적
3. 개요 – 이론 및 실험 원리
4. 실험재료 및 방법
5. 실험결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

단백질 분리
1) 염석(Salting out)
수용액 속의 단백질의 용해도는 수용액의 이온세기에 따라 달라진다. 수용액에 무기염이 첨가되면 염이 녹아서 이온이 되어 용액의 이온세기가 증가한다. 단백질의 용해도는 염이 첨가되면 증가(염용, salting-in)하다가, 염 농도가 일정 이상이 되면 용해도가 감소(염석, salting-out) 되어 단백질이 침전 된다. 용액 속의 증가된 이온들이 단백질과 결합하고 있던 물과 결합을 형성하기 때문에 단백질들끼리 소수성친화(hydrophobic interaction)에 의해 결합하면서 침전하게 된다. 염에 의한 단백질의 침전 정도는 단백질의 종류에 따라 달라지지만, 보통 분자량이 큰 단백질일수록 낮은 염 농도에서도 침전이 잘 이뤄진다. 단백질 침전물은 수용액을 원심분리하여 완전히 가라앉힌 후 분리할 수 있다. 이러한 원리를 바탕으로 염 농도를 달리하면서 크기가 다른 단백질을 조분획(fractionation) 할 수 있다. 염석을 이용하여 얻어낸 단백질 분획은 순도가 떨어지므로 원하는 단백질의 성질을 고려한 크로마토그래피를 이용하여 순도 높은 단백질 분획을 얻도록 한다. 단백질 염석에는 (NH4)2SO4, Na2SO4가 주로 사용된다. 수용액에 황산암모늄을 첨가하면, 황산암모늄 40%포화용액에서부터 단백질이 침전되기 시작하고, 80%포화용액에서 남은 단백질을 침전으로 얻어낼 수 있다. 실험을 진행할 때는 염을 한 번에 넣는 것이 아니라 약 10%의 포화간격으로 농도변화가 천천히 일어날 수 있도록 용해시켜야 한다. 단백질의 농도가 낮은 시료를 농축하는 경우에도 염석을 이용할 수 있는데, 이때는 충분한 양의 염을 한 번에 첨가하는 것이 유리하다.

참고자료

· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=430539&cid=559&categoryId=559
· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=297083&cid=559&categoryId=559
· http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=296098&cid=562&categoryId=562
· http://blog.naver.com/dyner?Redirect=Log&logNo=100206660018
· http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=399947