세포수측정법, 질소탱크 보관법

소개

cell banking, cell counting 관련 실험레포트 입니다.
세포수 측정에 필요한 식, 원리 hemacytometer 측정법, 측정 시료들의 사용 이유인 작용 원리 등에대해 자세히 기재했습니다.
액체질소탱크에 세포 저장 관련하여 freezing box의 이유, 사용 시약 및 그 작용원리 등에 대해 자세히 기재했습니다.
실험의 전반적인 이론 및 과정 이해를 하고 싶으시면 이 자료를 받으시면 됩니다.

목차

1. 제목
2. 목적
3. 원리
4. 실험방법
5. 실험재료
6. 결과
7. 디스커션
8. 결론

본문내용

동물세포는 급격히 얼릴 경우 물 분자의 냉각으로 인한 결정 때문에 손상을 입는다. 그리고 이런 손상은 후에 세포를 실험하기 위해 해동하였을 때 세포의 증식을 억제하며 세포 사멸을 유도한다. 따라서 세포 동결시 먼저 freezing box에서 -80℃에 보관 후 1-2일 후 -180℃ 액체질소 저장탱크에 보관하는 순서를 거친다. DMSO는 동결보존 시 보존제의 역할을 한다. glycerol을 사용하는 경우도 있으며 DMSO, glycerol 모두 세포 내 수분량을 감소시켜 급격한 온도 하강에의한 수분결정 생성을 방지한다. DMSO는 비중이 커서 가라앉기 때문에 충분한 suspension이 필요하며 세포독성이 있기 때문에 10%정도의 양을 사용한다.

<중 략>

이번 실험은 cell banking과 cell counring을 연습하는 것 이었다. 먼저 cell counting을 위해 hemacytometer를 이용했다. cell이 들어있는 플라스크에서 배지를 제거 후 HBSS 3ml로 washing했다. 이를 통해 배지 내 단백질을 씻은 후 trypsin처리를 해야 cell의 부착 단백질이 전달되어 cell 이 잘 분리되기 때문이다. 이 후 인큐베이터에 약 5분간 cell을 보관했는데 인큐베이터의 상온보다 높은 온도에서 cell이 활발히 작용하기 때문이다. 다음으로 media를 4ml정도 넣어서 trypsin의 작용을 정지시킨 후 튜브에 넣어 원심분리를 했다. 상층액을 버린 후 배지 5ml를 넣어 침전된 cell을 가볍게 suspension했다. 다시 tube에서 100ul를 채취하는데 이 때 cell 이 침강해서 균일하지 못한 세포수를 세는것을 방지하기 위해 3-4번정도 suspension을 했다. 이제 hematocytometer에 주입할 샘플을 만들기 위해 trypan blue 400ul를 넣어 전체 희석배수를 5배로 맏추었다.

참고자료

· 없음