단백질정제, 크로마토그래피, 전기영동

목차

Ⅰ. 서론

Ⅱ. 본론
1) 5.1 세포에서 순수한 단백질 추출하기
(1) STEP1 : homogenization
(2) STEP2 : differential centrifugation
(3) STEP3 : salting out
2) 5.2 칼럼 크로마토 그래피
① size-exculsion chromatography
② affinity chromatography
③ ion-exchange chromatography
3) 5.3 전기영동
① SDS-polyacrylamide gel electro- phoresis, SDS-PAGE
② isoelectric focusing
4) 5.4 단백질의 1차 구조 결정하기
① 단백질을 펩타이드로 절단하기
② 펩타이드의서열 결정 : 에드만 방법
5) 추가 자료

Ⅲ. 결론

Ⅳ. 참고문헌, 참고사이트

본문내용

5.1 세포에서 순수한 단백질 추출하기
Ⅰ. 서론
단백질 정제란? 복합 혼합물(complex mixture)로부터 단일 타입의 단백질을 분리하는 일련의 과정들이며 관심있는 단백질의 기능, 구조 그리고 상호작용을 분석하기 위해서 필수적이다. 단일 세포 내에는 여러 가지 많은 단백질들이 존재한다. 이렇게 세포 내에 들어있는 단백질들의 특성을 연구하려면 그 단백질 한 종류로만 구성되어 있는 sample이 있어야 한다. 그렇다면 세포에서 단백질을 어떻게 얻어내는지, 단백질 연구에 사용되는 크로마토그래피 기술에는 어떠한 것이 있는지, 정기영동이란 무엇인지,어떠한 종류가 있는지, 단백질의 1차 구조 결정하는 방법은 무엇인지에 대해서 Campbell 생화학 제 6판 5장의 주제인 ‘단백질의 정제 및 특성 규명 기술’을 자세히 읽고 요약해 보려한다.

<중 략>

- 세포에서 순수한 단백질을 추출을 하려면 어떻게 해야 하는가?
그 필수적인 첫 단계는 물질들 간에 차이가 나는 크기, 전하, 극성 등에 의해 단백질을 분리와 정제하는 것이다. 회수율(percent recovery)은 각 단계에서 정제 단백질이 얼마나 많이 남아 있는지를 추적하기 위한 것으로써 회수율은 정제과정 중에 점차 감소한다.
- 그렇다면 세포에서 단백질을 어떻게 얻어 낼까?

● 1단계 : 균질화(homogenization)
균질화란 세포를 파괴하여 여는 과정으로써 아래에는 균질화를 위한 몇가지 방법과 기술들을 나열해 보았다.
① 가장 간단한 방법으로써 조직을 적당한 완충용액과 함께 믹서로 가는 것
하지만 이 과정에서 미토콘드리아, 퍼옥시솜, 소포체 등의 많은 소기관들도 함께 파괴 된다는 단점이 있다.
② 포터-엘베헴(Potter-Elvejhem)균질기를 사용
시험관에 꼭 맞은 플런저(피스톤의 막대 봉)를 넣었다 뺐다 하는 것인데 믹서로 가는 방법과는 달리 여러 소기관들을 파괴시키지 않고 그대로 남아 있게 한다.
③ 초음파 분해(sonication)라는 방법은 음파를 이용하여 세포를 파괴
④ 냉동과 해동을 반복함으로써 세포를 파괴
⑤ 세제를 사용하여 세포막을 녹인 뒤 단백질을 추출

참고자료

· Mary K. Campbell, Shawn O. Farrell, 생화학, 곽한식 외 3명 옮김(제 6판;서울;라이프사이언스,2009), pp121~138
· MOTIFOLIO (SDS-PAGE 이미지)http://www.motifolio.com/6111177.html
· Seed-Proteome (2차 전기영동 이미지)http://www.seed-proteome.com/index.php?rub=_2D_electrophoresis
· Nerocard (원심분리이미지)http://www.neurocard.net/flat.php?stack=279
· Oregon State University (크로마토그래피 이미지)http://oregonstate.edu/instruct/bb350/textmaterials/ch05.html
· 코리아본뱅크, 골형성단백질 분리정제기술 특허, 의협뉴스,2012.12.12 http://www.doctorsnews.co.kr/news/articleView.html?idxno=84293