PCR증폭

목차

1. [결과]
2. [원리]
3. [고찰]

본문내용

두 번째 시료
→ PCR→ PCR 후 전기영동
처음 시료를 완성한 후 마지막 거품을 없애기 위해 원심분리를 하는 과정에서 튜브가 깨졌다. 남은 시료를 채취하여 두 번째 튜브를 만들어 PCR한 것을 전기영동하였다. (세 번째 열)
[원리]
01. Polymerase Chain Reaction (PCR)
1) 기본 정의 - 중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA분자를 증폭시키는 방법
- 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA합성이 가능
- 원하는 DNA부분만을 선택적으로 증폭시켜 여러 실험에 이용하며, 실험 결과를 토대로 의학적인 연구에 응용가능
※ 중합효소 연쇄반응이 이용되는 실험.
1) DNA sequencing -삽입된 유전 자 앞,뒤에 위치한 promoter 및 특정 염기서열을 primer로 이용하여 분석.
2) Probe 생산(증폭)
- DNA hybrid를 위해 cloning된 이중가닥 DNA의 증폭
3) Cloning - mRNA 로부터 특정 cDNA 및 vector에 삽입된 유전자 증폭
4) 돌연변이 검사
5) 유전자의 footprinting
6) Site-directed mutagenesis
- 특정 부위의 염기를 치환, 삽입 및 제거를 통한 유전자의 제조
02. PCR의 원리
1단계. DNA의 변성(denaturation)
90~96℃로 가열하여 dsDNA(double strand DNA)를 ssDNA(single strand DNA)로 분리시킨다. 이는 이중나선구조(double helix)를 지탱하던 수소결합(hydrogen bond)이 파괴되기 때문이다. 높은 온도일수록 ssDNA로 잘 이행되지만 Taq DNA polymerase도 온도가 아주 높은 상태에서는 활성이 낮아질 수 있으므로 보통 94℃로 맞춘다.

참고자료

· 분자생물학/George M. Malacinski 저/월드사이언스
· ‘Innovation http://blog.naver.com/kdy309
· ‘미스배의 블로그’ http://blog.naver.com/bsi1223