비색정량법 - Bradford 단백질 분석법

목차

1. 서론
2. 실습
3. 결과

본문내용

서론

 정량(Quantitative)과 정성(Qualitative)
- 정량 : 시료를 구성하고 있는 각 성분의 양을 구하는 분석법
- 정성 : 시료의 성분이 무엇인지 검출하여 알아내는 분석법

 비색법 : 미지시료 용액의 색을 표준 용액의 색과 견주어 농도를 결정하는 분석법

 Bradford 분석법의 원리

Bradford는 Coomassie Brilliant Blue G-250 dye, Phosphoric acid, Methanol의 혼합물로 불그스름한 갈색을 띈다. Coomassie Brilliant Blue G-250 dye는 산성용액 상에서 단백질과 결합하여 최대 흡광도를 465nm에서 595nm로 이동시킨다. (따라서, 595nm에서 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다.) Coomassie Brilliant Blue G-250 dye의 음이온이 단백질의 양이온 부분과 정전기적 인력에 의한 결합을 한다. 각각의 단백질 분자에 결합된 Coomassie Brilliant Blue G-250 dye의 수는 대략 단백질에 있는 양이온 수와 비례한다. 단백질에 결합한 Coomassie는 갈색에서 푸른색으로 색깔변화를 야기한다. 이때 이 dye가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정하는 것이다.

<중 략>

4) 3mL의 Bradford 발색시약과 각 시료 60uL를 각각 섞는다. 5) 상온에서 2분간 발색시킨다. 10분정도가 가장 좋고 30분을 넘기지 않도록 한다.
6) 흡광도를 측정한다. ( 1번 용액으로 Blank를 잡고 농도대로 측정한다)
7) 미지의 시료도 같은 방법으로 Bradford 3mL과 샘플 60uL를 섞어 발색시킨다.

참고 자료

없음