[생명공학] 단백질 분리와 전기영동

소개

단백질 분리 실험에관한 내용입니다... 전기영동을 이용한 단백질 분리에 대한 프로토콜이 잘 나와있습니다.

목차

단백질분리와 전기영동
A. 배양세포로부터 단백질의 분리
실험 방법
실험재료

B. 단백질의 정량
실험방법
실험재료

C. 단백질의 전기영동(SDS-PAGE)
실험방법
실험재료

본문내용

단백질분리와 전기영동

단백질을 분리하는 방법은 분리하고자 하는 단백질이 무엇인가에 따라서 매우 다양하다. 단백질이 핵에 존재하는 지 세포질에 존재하는지에 따라서, 또 단백질의 성질에 따라서 적당한 방법을 선택하여 써야한다. 가장 처음에는 조직이나 세포로부터 핵단백질이나 세포질단백질 또는 전체단백질을 분리하는 것으로 시작하며, 이로부터 수많은 정제과정을 거쳐야 원하는 단백질을 분리할 수 있다. 이 과정은 대단히 노력, 끈기, 자본을 요하는 것으로써 평생동안 한가지 단백질을 정제하는 과학자도 있음을 생각해야 한다. 여기에서는 정제되지 않은 전체 단백질(whole cellular protein)과 핵단백질(nuclear extract)을 분리하는 방법만을 소개하기로 한다. 물론 여기에도 수많은 방법이 있을 수 있다.

A. 배양세포로부터 단백질의 분리

1) 전체 세포단백질(whole cellular extract)의 분리

실험방법

1. 단층으로 자란 배양세포를 1 ml의 PBS로 두번 세척한다.

2. 배양접시에 붙은 상태로 얼음에 올려놓고 300 ml의 용해용액(RIPA 용액: 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% DOC[deoxycholic acid], 0.1% SDS, 50 mM Tris-Cl, pH 7.5)을 가한다.

3. 30분간 가끔씩 흔들면서 얼음에 둔다.

4. 1 ml pipette을 사용하여 수차례에 걸쳐 lysate를 올렸다, 내렸다를 반복하여 뻑뻑하지 않을 때까지 시행하면 genomic DNA가 모두 shearing 되었다고 볼 수 있다.

참고자료

· 없음