DNA Cloning 과 T7 RNA polymerase

목차

1. DNA Cloning
2. Vector의 3요소

본문내용

DNA Cloning: 관심이 있는 DNA 조각을 얻어서 벡터(vector) 라고 부르는 운반 DNA 분자에 연결시킨 후에 세포에 도입하면 새로 도입된 DNA를 지닌 세포가 분열을 거듭하여 클론(clone) 을 생성한다.
클론 내의 세포들은 모두 동일하며 도입된 DNA 사본을 포함하고 있다. 이 세포들을 대량으로 배양한 뒤 DNA를 추출하면 연구하거나 조작하기에 충분한 만큼의 원하는 DNA를 얻을 수 있게 된다. 이처럼 연구 등의 목적으로 동일하고 무수히 많은 DNA를 얻는 일을 DNA 클로닝이라 한다.
어떤 DNA의 절편도 벡터 DNA의 적절한 위치에 삽입시켜 클로닝 할 수 있다. 가장 널리 사용되는 벡터는 재조합(recombinant)DNA의 생산을 쉽게 하기 위해 조작된 세균성 플라스미드(plasmid)와 바이러스(virus)이다. 우선 벡터를 외래 DNA 절편을 만드는데 사용했던 제한효소(restriction enzyme)로 절단한다. 제한효소란 특정한 염기서열을 인지하여 DNA를 절단할 수 있는 효소를 말한다. 이렇게 같은 종류의 제한효소로 절단한 벡터와 외래 DNA 절편은 절단된 끝부분이 서로 상보적으로 결합할 수 있는 구조를 가지게 된다.

<중 략>

pET 발현벡터, T7 Promoter(and T7 terminator): 발현벡터의 프로모터는 숙주에서 목적 유전자의 전사효율을 조절함으로써 단백질의 발현 수준을 조절하는 중요한 유전인자이다. 발현벡터의 프로모터는 발현 유도 방법이 간편해야하며, 유도하지 않았을 때는 발현량을 최소한으로 억제할 수 있어야 한다. 단백질 발현을 유도하였을 때는 목적 단백질이 숙주세포의 총 단백질 생산량의 약 10~30% 이상으로 발현될 수 있도록 강력해야 한다. 대장균용 발현벡터에 사용되는 프로모터들 중 T7 promoter 는 바이러스인 T7 phage 에서 유래된 것으로 프로모터와 함께 T7 terminator 를 가지고 있다. 목적 유전자는 플라스미드 내의 T7 promoter 다음에 위치한 MCS 부분에 삽입되고, T7 RNA polymerase 에 의해 transcription 된다. pET system 은 Novagen 사에 의해 사용화된 발현 시스템으로 현재까지 개발된 대장균용 재조합 단백질 발현시스템 중에서 가장 강력한 시스템중 하나이다.

참고자료

· http://cafe.naver.com/solgent.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=40
· http://blog.daum.net/heejini----/996
· http://www.cyworld.com/01036419985/6203788
· http://underheaven.blog.me/140078600538
· http://blog.naver.com/smatice37?Redirect=Log&logNo=70107823773