Western Blot

소개

생명과학실험 레폿 A+받은 자료입니다~

목차

Ⅱ.실험 목적

Ⅲ.원리
(1) Blotting이라는 단어는 biological sample을 gel에서 membrane으로 옮겨 membran
(2) Running buffer의 각 조성의 역할
(2) Transfer buffer의 각 조성의 역할

Ⅳ.실험재료

Ⅴ.실험방법

Ⅵ.결과

Ⅶ.토론
(1)실험 시 특이사항
(2)band가 검출되지 않은 이유
(3)Blocking을 해야 하는 이유
(4)Monoclonal antibody와 Polyclonal antibody의 차이점
(5)PBS-T에 Tween 20을 넣는 이유

Ⅷ.참고문헌

본문내용

Ⅰ.실험 제목
Western Blot

Ⅱ.실험 목적
항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하여 단백질 혼합물로부터 어떤 특정단백질을 분석하는 Western Blot의 원리를 이해하고, 단백질의 SDS-PAGE분리, 단백질의 Gel로부터 membrane으로의 transfer, 항체반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색반응 등의 실험기법을 습득하게 한다.

Ⅲ.원리
(1) Blotting이라는 단어는 biological sample을 gel에서 membrane으로 옮겨 membran
e 표면에서 biological sample을 검출하는 것을 의미한다. Western Blotting은 1979 년 Towbin, etal에 의해 소개된 후, 현재까지도 일반적으로 단백질을 분석하는데 쓰 이고 있는 방법이다. Western Blotting의 첫 번째 단계는 우선 여러 단백질들을 SDS-PAGE로 크기대로 분리하는 것이다. SDS-PAGE 후, 단백질을 일반적으로 nitrocellulose 또는 polyvinylidene fluoride(PVDF) membrane에 옮긴다. Membrane으로 단백질을 옮긴 후, membrane 표면에 항체가 비특이적으로 붙는 것 을 방지하기 위해 blocking 과정을 거친다. Blocking과정이 끝나면 특정 단백질에 대 한 항체를 membrane과 반응시켜 membrane에 있는 단백질과 결합하도록 한다. 이 때, 항체에는 효소가 결합되어 있어 항원-항체 반응이 끝난 후 효소에 대한 기질을 넣어주면 효수가 있는 곳에서만 기질 반응이 일어나게 된다. 이러한 기질반응은 색을 발하거나, 형광을 발하는 침전물을 membrane 표면에 침전시킴으로써 검출이 가능하 게 된다. 가장 민감한 검출방법은 chemieluminescent 기질을 이용하는 방법이다.

참고자료

· 2013.04.24, http://blog.naver.com/PostView.nhn blogId=shinek20logNo=90015 052221widgetTypeCall=true.htm
· 2013.04.24, http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php Board=expqnaid=325 36.htm
· 2013.04.24, http://www.kosen21.org/board/whatis/boardwhatisdetailview.jsp b id=0000000762210idmajor=0000000000762210boardname=WHATIS#00000 00762210.htm
· 2013.04.24, http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php Board=expqnaid=312 43.htm
· David L. Nelson, Michael M. Cox(2008),『LEHNINGER PRLNCLPLES OF BIOC HEMISTRY 5th edition』, FREEMAN, pp.173