단백질 분리 및 정제 기술에 대하여

목차

1. 서 론
1) 정제의 목적
2) 정제의 준비

2. 단백질의 분리
1) Ammonium sulfate
2) MWCO
3) Dialysis

3. 단백질의 정제
1) Chromatography
2) LPLC
3) HPLC · FPLC
4) Affinity chromatography
5) Ion-exchange chromatography
6) Gel filtration
7) 역상 chromatography
8) 소수성 chromatography
9) Electrophoresis
10) 등전점 electrophoresis
11) SDS-PAGE, 2D-PAGE

4. 참고문헌(Reference)

본문내용

1. 서 론

◆ 정제의 목적

단백질 분리정제란 목적하는 단백질을 순도 높게 분리 및 정제하는 것이다. 단백질 분리정제를 하는 목적은 생리활성의 해석, 고차구조의 해석, 단백질 분자종의 동정(부분 아미노산 서열 분석), 항체 제작을 위한 항원의 정제 등 여러 가지가 있으며 목적에 따라 정제 방법이 크게 다르게 진행된다. 이때 정제한 단백질의 양과 정제 단백질의 변성상태의 유무는 주의 깊게 점검하여야 한다. 재조합 단백질을 정제하는 경우와 미지의 단백질을 정제하는 경우는 정제 방법이 크게 다르다. 정제에 큰 영향을 미치는 요인으로서는 시료의 선정, 목적 단백질의 검출법, 단백질의 안정성, 단백질의 추출법 등이 있으며, 이에 대해서도 사전에 충분한 검토가 필요하다. 단백질 분리정제를 위해 준비해야 할 것이 있다.

◆ 정제의 준비

1.특정 생물학적 발현에 관련 있는 단백질의 유무 확인
특정 생리활성을 가진 미지의 단백질을 정제하는 경우 그 현상이 한 종류의 단백질에 의해서 일어난다고 볼 수 없으며 여러 종류의 단백질의 복합작용, 단백질 이외의 분자에 의해 일어날 수도 있다

<중 략>

그림 소수성 chromatography의 원리
소수성 chromatography는 미변성 조건에서 단백질을 분리할 수 있다. ion-exchange, gel filtration chromatography 등으로 충분히 정제할 수 없는 경우 정제 초기 또는 중기에 유효하며, ammonium sulfate 침전 및 이온교환 다음의 단계에 사용하기 쉽다. 원리는 소수성 차이를 이용하여 분리한다. phenyl기, octyl기(), pentyl기(), butyl기() 중 소수기를 가진 resin에 고농도의 염의 존재하에서 단백질을 결합시킨 후 염농도의 하강 농도구배로 용출한다. 특징으로는 중성조건하에서 역상 chromatography이며, 고염농도에서 단백질의 소수적 상호작용이 증가하는 것을 이용한다. 평형화 buffer의 염 농도는 목적 단백질이 염석되는 농도보다 조금 낮아진다.
◆ Electrophoresis

고분리능을 가지는 전기영동법으로 단백질을 정제할 수 있는 수단으로 이용가능하다.

참고자료

· TaKaRa, 『Refolding CA kit 실험강좌』,
· 그림1] 주한승, 효소공학 수업자료, 2012
· 그림2] TaKaRa, 『Refolding CA kit 실험강좌』,
· 그림3] TaKaRa, 『Refolding CA kit 실험강좌』,
· 그림4] TaKaRa, 『Refolding CA kit 실험강좌』,
· 그림5] 주한승, 효소공학 수업자료, 2012
· 그림6] 주한승, 효소공학 수업자료, 2012
· 그림7] 주한승, 효소공학 수업자료, 2012