대장균으로부터 chromosomal DNA의 분리

목차

2R-1. 원핵세포에서 Chromosomal DNA와 Plasmid DNA의 형태학적인 차이점을 설명하라.
2R-2. DNA농도를 측정하는 방법을 2가지 이상 설명하라.
2R-3. DNA를 염색하는 방법중에는 EtBr을 이용하지 않는 다른 방법들도 존재한다. 어떤 방법들이 있는지 설명하라.
2R-4. Chromosomal DNA와 같이 분자량이 큰 DNA들은 일반적인 Agarose gel에서 분리하기가 힘들다. 이 때 orthogonal field alternation gel electrophoresis (OFAGE)가 사용되는 데 이 전기영동법을 설명하라.

본문내용

2R-1. 원핵세포에서 Chromosomal DNA와 Plasmid DNA의 형태학적인 차이점을 설명하라.
1) Chromosomal DNA 의 구조
: 원핵세포의 chromosomal DNA는 불규칙한 모양으로 핵양체(nucleoid)라는 부분에 모여 있다. 대부분의 원핵세포는 단일한 고리 모양의 이중나선 DNA(deoxyribonucleic acid)를 지니지만 어떤 세균은 선형 DNA를 염색체로 지니기도 한다.
핵양체의 화학조성을 살펴보면 분리된 핵양체 무게에서 60%가 DNA이고 30%는 RNA, 10%는 단백질이다. DNA는 RNA와 핵양체 단백질과 결합하여 고리 모양을 이루며 코일 형태로 감겨 있을 것이다. 진핵세포와 DNA를 응축하는 데 히스톤과 유사한 단백질이 관여하지 않는다.

<중 략>

5) DAPI staining의 응용
- DAPI staining은 어디에 사용되는가?
DAPI staining은 비교적 높은 해상도의 이미지를 얻을 수 있기 때문에 단순한 핵 염색에도 많이 사용되며, 개중 apoptosis detection kit로써 가장 많이 사용된다.
Apoptosis가 일어나면 cell nucleus의 morphology와 permeability가 변화하는데 DAPI staining을 통해 이러한 변화들을 비교함으로써 normal cell과 apoptotic cell을 구분해낼 수 있게 된다.
기본적으로 apoptosis가 일어나면 cell의 symmetry가 깨지고, nuclear chromatin의 compaction과 fragmentation이 일어나며, cytoplasm이 수축하고, DAPI의 투과성이 커지는 현상(light intensity가 증가)이 일어나게 된다.

6) 결론
DAPI staining은 DAPI라는 분자가 DNA에 binding하여 cyan 색의 형광을 나타내는 것을 이용한 nuclear chromatin 염색법으로, 쉽고 간단하여 핵을 염색하거나 apoptosis를 detection 하는데 유용하게 사용될 수 있다.

2R-4. Chromosomal DNA와 같이 분자량이 큰 DNA들은 일반적인 Agarose gel에서 분리하기가 힘들다. 이 때 orthogonal field alternation gel electrophoresis (OFAGE)가 사용되는 데 이 전기영동법을 설명하라.

참고자료

· 없음