Immunochemistry (ELISA)

소개

면역조직화학법에 대하여 기초와 를 정리하였고,
그의 응용과 기본 베이스되는 지식을 정리하였습니다.
그리고 예로 ELISA에 대한 자료를 정리하였습니다.

목차

1. Immunohistochemistry란?
(1) 면역조직화학법의 원리

(2) 면역조직화학법의 종류

(3) 면역조직화학에서의 항체의 검출

(4) 면역조직화학법의 응용
① HRP (HorseRadish-Peroxidase) Conjugation Technique
② PAP (Peroxidase-AntiPeroxidase) Method
③ ABC (Avidin-Biotin Complex) Method
④ LBC (Labeled (Strep)Avidin-Biotin) Method
⑤ NBA (Non-Biotin Amplification) Method

2. 항원 (Antigen)
(1) 항원성과 면역원성 (antigenicity vs immunogenicity)
(2) 면역원성을 결정하는 요인들
(3) 항원결정부위 (antigenic determinant, epitope)

3. 항체 (Antibody)
(1) 다클론항체와 단클론항체 (polyclonal and monoclonal antibody)
① 하이브리도마 (hybridoma)의 제조
② hybridoma 선택의 원리
③ 단클론항체의 생산

(2) 항체의 구조 (Structure of Immunoglobulins)
① 항체의 기본 구조
② 항체의 입체 구조
③ 항체의 세포막형과 분비형

(3) 항원과 항체의 결합

4. Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
(1) ELISA란?

(2) ELISA의 원리

(3) ELISA의 종류
① Competitive ELISA
② Indirect ELISA
③ Sandwich ELISA

(4) Sandwich ELISA 실험방법
① Sandwich ELISA 실험 과정
② 각 실험 단계마다 특징과 주의할 점

본문내용

(2) 면역조직화학법의 종류

면역조직화학적 검사방법은 직접법 (Direct Method) 과 간접법 (Indirect Method)으로 크게 구분할 수 있으며, 간접법은 표지물질을 결합시킨 항체를 사용하는 표지 항체법 (Lable Conjugate Antibody Method)과 비표지 항체법 (Unlabelled Antibody Method)으로 구분된다.
간접법 가운데 가장 간단한 표지항체법은 일차항체에는 효소를 부착하지 않고 일차항체의 Fc부분에 특성을 갖는 이차항체에 효소를 부착하여 사용하는 방법이다. 이때 일차항체를 제조하는 동물과 이차항체를 제조하는 동물은 달라야 한다. 비표지항체법은 일차 혹은 이차항체에 표지물질을 부착시키지 않는 방법으로서 민감성이 매우 높은 방법이다. 여기에 해당되는 검사방법은 PAP법, ABC법 그리고, Protein A 법 등이 있다.

<중 략>

또한 rheumatoid factor가 포함되어있는 serum이나 plasma의 경우에는 그 안의 다른 물질(e.g. specific IgG Antibody)과 반응하여 solid phase에 고정될 수 있다. 이러한 경우에는 chromatographic 또는 centrifugal separation을 통해 IgG나 IgM을 제거하는 것이 좋으며, 정량분석의 경우에 분석을 요하는 물질이 매우 높은 농도로 존재하는 sample은 "hook effect"를 보일 수 있으므로 적당한 비율로 희석하는 것이 필요하다.
Conjugates
매우 다양한 enzyme이 항원이나 항체와 결합되어 conjugate로 사용되고 있는데, 이러한 conjugate로 사용되기 위해서는 안정성, 높은 반응성, 정제도 그리고 안정된 conjugate의 구조 등이 요구된다. 사용되는 enzyme중에 이러한 특성을 고려하여 Alkaline phosphatase와 Horse-radish peroxidase가 가장 널리 이용된다.
Substrate
Conjugate에 사용된 enzyme과의 민감한 반응이 substrate로서 가장 요구되는 점이다.

참고자료

· 없음