양배추로부터 PLD 추출(예비)

목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3.시약 및 기구
4.실험방법

본문내용

2. 실험원리
1)효소
생체 내 화학 반응을 촉매 하는 특이적 기능을 가지고 있는 단백질로 세포 내에서 생성된다. 보통 40~50℃가 최적 온도이며 60℃ 이상에서는 단백질 부분이 변질되어 기능을 잃는다. 또한 pH 5~8에서 최대 활성을 가지며 기질의 농도 역시 반응에 영향을 미친다.
① 특징
생 세포에서 만들어진다.
생체촉매제 작용을 한다.
기질특이성이 있다. 상호작용하는 기질과 자신이 촉진하는 반응에 대해서 선택적이다.
단백질이다.
산이나 pH에 의해 영향을 받는다.
② 성질
단백질의 모든 특성을 나타낸다.
열, 강산, 강염기, 단백질 변성제에 의해 구조가 변하며, 촉매활성을 잃어버리게 된다.
저분자 화합물이나 금속 이온과 같은 보조 인자를 가진다.
단백질에 보조 인자가 결합해 완전한 촉매활성을 나타내는 효소를 완전 효소라 한다.
효소는 기질에 대해 특이적인 선택성을 가진다.(효소 특이성)
생체세포에서 만들어져 생체 내 반응을 촉진한다. 거의 모든 생체 내 반응은 스스로 만든 효소의 도움을 받아 이루어진다.
③ 효소 활성에 영향을 미치는 요인

< 중 략 >

3)효소의 분리 및 정제
①적합한 효소원과 효소의 반응속도 측정 방법 결정
▷적합한 효소원의 결정 : 효소를 많이 얻으려면 우리가 얻고자 하는 효소가 가장 많이 존재하는 동물 또는 식물을 탐색하여 결정. 또한 생체가 결정된 후에는 어느 세포 어느 부위에 가장 많이 존재하는 가를 찾아야 한다.
▷효소의 반응속도 측정방법 결정 : 효소원이 결정되면 이 효소의 반응속도 측정방법을 선택하여야 한다. 효소의 분리 및 정제하는 단계에서 정확한 반응속도 측정방법보다는 신속하고 간편한 방법이 더 바람직하다.
②효소의 추출
plasma membrane이나 세포 내막에 붙어있지 않은 효소의 추출
⇒ plasma membrane을 부수기만하면 쉽게 추출할 수 있는 효소
▷동물의 경우
조직을 얻은 후 냉장고 속에 보관한다.(효소에 의한 세포 자신의 자가분해 억제)
지방 및 연결 조직 등을 제거하고 조직의 막 냉각 후 녹인다.
초음파 파쇄기를 이용하여 파쇄 시키거나 진공에서 건조시키는 방법들로 파괴시킨다.

참고자료

· 없음