Plasmid Purification & DNA 전기영동(예비보고서)

목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3. 시약 및 기구
4. 실험방법

본문내용

1. 실험목적
① 플라스미드 DNA는 박테리아의 DNA에 비해 크기가 매우 작고, 상보적인 두 가닥의 DNA 사슬이 공유결합으로 연결된 원형을 유지한다. 이러한 구조적 특징을 이용하여 Plasmid DNA를 분리한 후 정제해 본다.
② DNA Purification 한 것을 이용하여 전기영동을 통해 DNA를 분리하여 확인한다. 전기영동의 원리에 대해 알고, agarose gel 전기영동 방법을 숙지한다.

2. 실험원리
1) Plasmid
세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 복제를 통해 증식할 수 있는 DNA로, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다.
2) Plasmid DNA의 분리 및 정제
①Plasmid를 지닌 박테리아에서 추출을 통해 Plasmid DNA 분리
-세포추출은 단백질을 제거하고 에탄올 침전으로 DNA를 응축시킬 수 있다.
②Plasmid DNA와 염색체 DNA의 물리적인 차이점에 의해 분리
-Plasmid와 염색체 둘 다 구형을 띠는데 추출을 할 때 염색체는 선형조각으로 깨지고 Plasmid는 구형을 그대로 유지하는 차이점을 이용한다.
3) Plasmid 분리 방법(Alkaline lysis procedure)
①가장 일반적으로 쓰이는 분리방법
②세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것
③중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것
☆ Alkali lysis method 의 핵심 원리
①Buffer 1 (Resuspension solution) : Tris-Cl(pH8.0), EDTA, Sugar(sucrose, glucose)
- EDTA는 세포벽의 주성분인 Calcium ion을 제거하여 세포벽을 무너뜨린다.
세포벽을 제거하는데 Lysozyme을 사용하기도 한다.

참고 자료

없음