in vitro packaging system

소개

시험관 속(in vitro)에서 recombinant phage DNA를 packaging하는 방법인 in vitro packaging system에 대한 내용입니다.

목차

1. 서론 (in vitro packaging 이란?)
2. Single-strain packaging system
3. Two-strain packaging system
4. in vitro packaging system

본문내용

※ in vitro packaging ?
시험관 속(in vitro)에서 recombinant phage DNA를 packaging하는 방법.
in vitro에서 파지 DNA를 단백질의 각 안에 싸서 파지입자로 만드는 방법으로, DNA Cloning에서 이 방법으로 재조합 DNA를 패키지하면 대장균에 DNA를 효과적으로 도입할 수 있다.
λ DNA분자의 transfection은 mature λ phage의 infection과 비교해 볼 때 비효과적이다.
따라서 recombinant λ 분자가 시험관내에서 λ의 capsid protein안으로 packaging될 수 있다면 효과적일 것이다. Packaging을 위해선 수많은 λ 단백질들이 필요하지만 이것들은 defective λ phage를 세균에 감염시킴으로써 고농도로 얻을 수 있다.

(a) Single-strain packaging system
cos site에 돌연변이를 가지고 있기 때문에 λ concatamer를 정상적으로 절단하는 endo-
nuclease에 의해 인식되지 못하는 defective λ phage를 이용한다.
이 defective phage는 packaging에 필요한 모든 단백질을 합성함에도 불구하고 복제할 수 없다. 이 단백질들은 세균 안에 축적되어 있으므로 숙주세포를 파괴시키고 미리 준비한 정상적인 cos site를 포함하고 있는 재조합 DNA와 혼합시키면 재조합 DNA가 capsid내로 들어감으로써 완전한 λ phage가 된다.

참고자료

· 없음