단백질분리및정제기술에대하여

목차

1. 단백질 기술이란?

2. 단백질 분리 및 정제 기술
가. 단백질의 분쇄 및 원심분리
나. 염석 (Salting Out)
다. 투석 (dialysis)
라. 크로마토그래피 (Chromatography)
마. 전기영동 (Electrophoresis)

3. 배양세포로부터 단백질의 분리

본문내용

단백질은 아미노산(amino acid)이라고 하는 비교적 단순한 분자들이 연결되어 만들어진 복잡한 분자로, 대체적으로 분자량이 매우 큰 편이다. 단백질을 이루고 있는 아미노산에는 약 20 종류가 있는데, 이 아미노산들이 화학결합을 통해 서로 연결되어 폴리펩티드(polypeptide)를 만든다. 이때 아미노산들의 결합을 펩티드결합이라 하며, 이러한 펩티드결합이 여러(poly-)개 존재한다는 뜻에서 폴리펩티드라 부른다. 넓은 의미에서 단백질도 폴리펩티드라 할 수 있으며, 일반적으로는 분자량이 비교적 작으면 폴리펩티드라 하고, 분자량이 매우 크면 단백질이라고 한다.

<중 략>

(1) dialysis bag 의 한쪽 끝을 dialysis용 클립으로 꽂고 bag에 sample을 넣는다.
(2) dialysis bag의 반대쪽도 클립을 꽂아 완전 밀봉한다.
(3) 한쪽 dialysis용 클립에 끈을 걸어 비커 바닥에 닿지 않도록 하여 비커에 고정시킨다.
(4) bag이 잠길 정도로 buffer를 넣어 교반 시킨다.
(5) buffer가 충분히 mixing 되도록 교반 시킨 후, 클립을 풀고 sample을 비커에 옮겨 담는다.
(6) centrifugation (3000rpm/10min)
(7) 상등액 회수(70㎖)
(8) 냉동보관

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5. 10% NP-40을 25 ml 넣고 10초간 세게 vortex한 후 4℃에서 15,000 rpm으로 1~2분간 원심분리한다. 상온에서 최고속도로 30초 원심분리하기도 한다.
세포의 종류에 따라서 NP-40의 농도를 변화시키는 것이 좋은데, 이를 넣지 않는 실험자도 많이 있다.
6. 상층액을 버리고 침전된 핵의 부피(packed nuclear volumn, PNV)를 가늠해본다. 이를 50 ml의 용액 C에 풀고, 4℃에 설치된 shaker에서 비교적 강하게(level 6~7) 흔들면서 15분간 둔다.
7. 4℃ 원심분리기에서 최고속도로 5분간 원심분리한다. 상층액이 핵단백질이다. 약간의 하얀 물질이 딸려올 수 있는데, SDS-PAGE 및 western blot 용으로는 큰 문제가 없다. 0.5~1.0x106 세포에서 출발한 경우 1~2 mg/ml 농도로 총 55~100 mg의 단백질을 얻을 수 있다.

참고자료

· 한국 기능유전체 연구소
· 재조합 단백질의 생산 및 분리 정제 기술: 유전공학 연구소 이상기
· 친화성 고분자 유도체 합성 및 단백질 분리 정제에 관한 연구