전기영동법

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전기영동이란?

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본문내용

-전기영동법
전기영동(electrophoresis)이란 하전된 입자가 전기장에서 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 말한다.
이때 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 전하량, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정된다.
따라서 어떤 용액과 지지체에서 하전된 입자의 이동속도는 분자 자체의 성질에 따라서 결정된다.
그러므로 전기영동법은 아미노산, 단백질, 핵산들과 같은 하전된 물질들을 분리하는 데 매우 효과적인 수단으로 이용된다.
일반적으로 단백질을 분리하는 것은 단백질이 가진 2가지 특징, 다시 말하면 전하와 분자량의 차이를 이용하는 것이다.
2차원 전기영동은 통상 1차원적으로 등전점 전기영동(Iso Electric Focusing: IEF)을 하고, 단백질을 등전점으로 분리해서 다시 2차원적으로 SDS-전기영동(SDS-PAGE)으로 등전점이 같은 단백질을 분자량을 기준으로 분리하는 방법이다.
이 방법은 최초 O’Farell1)이 고안하였지만 지금은 1차원에서 높은 재현성을 얻을 수 있는 고정화 pH 구배(immobilized pH gradient: IPG) gel을 사용하므로 고도의 기술적 숙련도를 필요로 하지 않는다.

<중 략>

-antibody-
protein을 immunoblotting을 할 경우에, 우리는 반드시 그 protein의 epitope을 하나라도 알아야 하며, 그래야만 나중에 antibody를 이용해서 detection 할 수 있다.
보통 antibody를 얻는 방법으로, protein을 토끼에 injection하고, 혈액을 뽑아내서 centrifugation 시킨 후에, 혈청만 얻어낸다.
이 혈청 안에 있는 IgG를 goat(양)에 다시 주사한다.
이렇게 하면, 첫 번째 혈청 안에는 protein에 대한 1차 antibody가 형성되고, 양의 혈청 안에는 2차 antibody가 형성되어 이용할 수 있게 된다.
이번 실험에서 이용할 protein은 EF-2(100kD)에 대한 1차 항체와 이 1차 항체를 다시 detection해낼 2차 항체를 이용하게 된다.

참고자료

· http://www.genehunters.co.kr/Training/03_1.htm
· http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/protein_purify_ep.php
· http://web.skku.edu/~jonghlee/home/w_blotting.htm
· http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/western_blot.php