Competent cell을 이용한 Ampicillin 내성을 가진 DNA transformation

소개

분자생물학실험 Transformation(형질전환)에 관한 내용입니다.
다른 레포트와 다르게 논문 형식으로 만들었습니다.

목차

I. Introduction - 실험에 대한 원리와 배경, 목적등을 기술
II. Method - 실험에 사용한 재료, 기구, 방법등을 기술
III. Result - 실험 결과를 기록
IV. Conclusion & Discussion - 실험 결과에 관한 해석 및 고찰
V. Reference - 참고문헌

본문내용

형질전환(Transformation)은 유전물질인 DNA를 다른 계통의 살아 있는 세포에 주입했을 때, DNA가 그 세포에 들어가 유전형질을 변화시키는 현상을 말한다. 일반적으로 특정한 기능을 가지고 있지 않은 생물체를 기능을 갖도록 만들 때 쓰는 방법으로, 특정한 기능을 가지는 DNA 단편을 제한효소로 자른 후 plasmid DNA와 같은 vector에 삽입하여 재조합 시킨 후에 vector를 수용하는 competent cell안에 집어넣어 새로운 기능을 가지도록 한다. 본 실험에서는 ampilicillin(Amp)에 내성을 갖게 하는 유전체를 가진 bacteria의 plasmid DNA를 추출하여 제작한 competent cell에 형질전환 시켜 형질전환이 잘 되었는지 아닌지 확인하고, 형질전환이 된 cell 내의 DNA를 추출하여 제한효소로 잘라 전기영동으로 그 크기를 확인해 보았다.

I. Introduction
형질전환(Transformation) 이란 외부에서 주어진 DNA에 의해 생명체의 개체나 세포의 형질이 유전적으로 변하는 현상을 일컫는 말로, 1928년 Fred Griffith가 폐렴쌍구균(Pneumococcus)를 이용하여 처음으로 밝혀냈다[1]. Griffith는 병변을 가지지 않는 smooth(S)형과 병변을 유발하는 rough(R)형을 이용하여 실험을 하였는데, heat-killed 시킨 R형을 보통의 S형과 in vitro에서 함께 growth 시킨 후 이것을 mouse에게 주입하였을 때, 폐렴이 유발된 mouse를 관찰하므로써 유전물질이 다른 개체로 옮겨질 수 있다는 것을 밝혀냈다. 그 후 1944년 미국의 O. T. Avery, C. M. MacLeod, M. McCarty는 그리피스의 실험을 바탕으로, 죽은 S형에서 추출한 DNA를 R형의 살아있는 세포에 가하면 R형균이 S형으로 변하는 형질전환 현상을 발견했다[2]. 따라서 DNA는 유전적인 정보를 담고 있는 물질이며 이것이 다른 개체에게 전달되는 형질전환을 통해 그 개체가 가지는 본래의 기능을 바꿀 수 있다는 것이 완전히 입증되었다.

참고자료

· The Significance of Pneumococcal Types, Griffith F. J Hyg (Lond). 1928 Jan;27(2):113-59.
· Studies on the chemical nature of the substrance inducing transformation of pneumococcal types : induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type III. Avery OT, Macleod CM, McCarty M. J Exp Med. 1944 Feb 1;79(2):137-58.
· DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Sanger F, Nicklen S, Coulson AR.
· Proc Natl Acad Sci U S A. 1977 Dec;74(12):5463-7.
· DNA sequence at the C termini of the overlapping genes A and B in bacteriophage phi X174. Smith M, Brown NL, Air GM, Barrell BG, Coulson AR, Hutchison CA 3rd, Sanger F. Nature. 1977 Feb 24;265(5596):702-5