형질전환식물체에서 항체단백질생산

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형질전환식물체에서 항체단백질생산 논문 발표 피피티

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대장암 치료항체인 ㅊ 를 발현하는 형질전환 식물과 유방암 치료항체인 mAb BR55를 발현하는 형질전환
식물은 기존에 연구발표 된 식물체를 이용하였다[4,7]. 각각의 항체를 생산하는 식물들을 외부환경과 잘 격리된 온실에서
키웠다. 3개월 정도의 식물생장기간을 통해 꽃의 분화를 유도한 후, mAb CO17-1A를 발현하는 식물의 꽃 수술을 제거하고 mAbBR55의 화분을 꽃 수술이 제거된 mAb CO17-1A 발현식물 꽃의 암술에 수분 수정시켰다(Fig. 1A). 수분수정 된 꽃은 다른 꽃의 화분으로부터의 수분을 막기 위하여 봉지를 씌웠다. 3-4주 정도가 지나면 수분수정 된 식물에서 씨앗을 수확하였다. 씨앗은 20%의 에탄올과, 10% 의 락스를 이용하여 세정한 뒤 Watman filter paper 위에 올려서 여분의 습기를 제거하고 100 μg/ml 의 kanamycin 항생제를 포함하는 MS media위에 올려놓아 씨앗의 싹이 트게 하였다. 발아는 16 시간과 8시간 간격의 light:dark 상태로 25oC 에서 유도하였다. 4 주 뒤, 발아된 씨앗을 흙으로 옮겨서 랩으로 덮어서 성장시켰다. 비 형질전환 씨앗도 같은 방법으로 배양하되, 항생제가 없는 조건에서 키워서 대조군으로 사용하였다.

<중 략>

각 식물체로부터 genomic DNA를 DNeasy kit (Quiagen, Hilden, Germany) 이용하여 분리하였다.
-> 대략적으로 보면, 100 mg 정도의 잎을 kit 내의 버퍼(buffer) 와 함께 파쇄하여 DNA column 에 통과시켜 순수한 DNA 를 50 μl의 TE 버퍼를 이용하여 녹여냈다.
2) 분리한 DNA를 이용하여 mAb CO17-1A 및 mAb BR55 항체의 중쇄(heavy chain, HC) 와 경쇄(light chain, LC) 유전자 증폭을 위하여 디자인 된 프라이머(primer) 를 이용하여 PCR을 수행하였다(Table 1).
-> PCR mixture 는 식물체의 잎에서 분리한 genomic DNA (1 μl) 를 template DNA로 사용하며 10 pmol/μl 농도의 forward 및reverse primer을 iTaq premix (Intron Biotechnol. Inc., Seongnam, Korea)와 함께 반응하였다.
3) PCR 반응 조건으로는 94℃ 에서 20초, 62℃에서 20초, 72 ℃ 에서 90초의 denaturation-annealing-elongation 과정을 30회 반복 수행하였다.
PCR 결과 예상 크기는 Table1에서 나타낸 바와 같다. 비 형질전환 식물의 DNA 샘플을 negative control로 사용하였다.

참고자료

· 없음