Column chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase분리

소개

실험레포트

목차

I. 실험주제

II. 실험목표

III. Introduction

IV. Materials

V. Methods

VI. Discussion

VII. Reference

본문내용

I. 실험주제 : 단백질 분리정제 및 기능분석

II. 실험목표 : Column Chromatography를 이용하여 Alkaline phosphatase를 분리한다.

III. Introduction
1. Column Chromatography?
- Chromatography
크로마토그래피(chromatography)란 다공성 흡착제 입자를 일정한 길이만큼 충전시킨 관(column)에 용질이 들어 있는 혼합물을 통과시켜 흡착제 입자에 대한 용질의 흡착 특성 차이에 근거하여 분리하는 방법이다. 즉, 시간이 지나면서 흡착제에 잘 흡착되지 않는 용질은 관의 멀리까지 이동하고 쉽게 흡착되는 용질은 이동하는 속도가 느리다.

<중 략>

VI. Discussion
1. 실험과정 상의 의문점
- 6번 과정에서 또 한 번 wash해주는 이유?
bead에 charge에 상관없이 붙어 있거나 bead 사이사이에 끼어있는 물질,
즉 nonspecific bound protien을 제거해 주기 위해서
- elution과정에서 NaCl을 넣어줄 때, 저농도에서 고농도 순서로 넣어준 이유?
만약, 고농도의 NaCl을 먼저 넣어준다면 bead에 binding한 protein이 그 친화도의 차이에 관계없이 떨어져 나오기 때문이다. 저농도부터 고농도로 진행해야 친화도가 낮은 것부터 높은 것까지 차례로 분리해낼 수 있다.
- 각 농도마다 2번에 걸쳐 elution한 이유?
농도차에 따른 분리 뿐만 아니라 시간차에 따른 분리도 보기 위해서
- Protien Mixture와 Flow through 까지 sample로 하는 이유?
SDS-PAGE 할 때, 비교해서 P.M에는 있고 F.T에는 나타나지 않는, bead와 결합하는 protein을 알아내기 위해서. (protein mixture는 AP가 존재하는 positive control이고, flow through는 AP가 존재하지 않는 negative control)

참고자료

· http://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%8B%A4%EC%9D%B4%EC%97%90%ED%8B%B8%EC%95%84%EB%AF%B8%EB%85%B8%EC%97%90%ED%8B%B8_%EC%85%80%EB%A3%B0%EB%A1%9C%EC%8A%A4, 2012년 3월 27일
· 네이버 백과사전, http://100.naver.com/100.nhn?docid=99849, 2012년 3월 28일