단백질_정량_

소개

단백질 정량

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본문내용

단백질 정량 (Bradford 법)
실험 목적
어떤 영양소의 함량을 알아볼 수 있는 정량 분석을 통하여 단백질의 정량을 알아보고 단백질의 미지 시료를 확인해 보도록 한다.

단백질 정량분석법
시료 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정.
단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질 시료에 있는 다른 성분들의 본질, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라서 적당한 방법을 선택해야 한다.
단백질을 정량하는 방법
- Colorimetric 방법 : Lowry, Bradford, Biuret, kjeldahl, Bicinchonic Acid, UV법 등
- Electrophoresis 방법 : SDS 겔 전기영동,

단백질 정성분석법
단백질은 여러 종류의 시약과 반응하여 고유의 색을 나타내는데 이것은 단백질을 구성하고 있는 특수한 아미노산의 잔기나 카르복실기 또는 아민기와의 반응으로 나타나는 정색반응이다. 이 반응을 통하여 단백질의 유무를 확인할 수 있다.

<중 략>

Bradford법 실험 방법
2.미량측정방법
-이 방법은 표준법 보다 감도가 높고 사용되는 단백질 양이 적기 때문에 시료를 아끼기 위해 많이 이용한다.
①1-10uℓ를 1회용 큐벳에 취하고 증류수를 가하여 100uℓ가 되게한다. 단백질의 농도를 모를 경우에는 원액 10배 또는 100배를 희석액을 취한다.
②검량곡선을 얻기 위하여 10, 20, 40, 60, 80, 100uℓ의 단백질 용액을 시험관에 각각 취하고 증류수를 가하여 100uℓ가 되게 한다. 공시험으로 시료 대신에 증류수 100uℓ를 취한다.
③증류수 700uℓ를 시험관에 가하고 섞은 후 염색지시약을 200uℓ를 시험관에 가하고 거품이 생기지 않게 흔들어 섞는다.
④염색시약을 넣고 5~30분 사이에 595nm에서 흡광도를 측정 하여 표준 정량곡선과 비교하여 단백질량을 계산한다.

참고자료

· 없음