Plasmid Mini Prep

소개

Plasmid Mini Prep

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Materials
Ⅲ. Methods
Ⅳ. Result
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. Reference

본문내용

Ⅰ. Introduction

플라스미드는 세균을 비롯해 많은 생물들이 염색체 외에 추가로 갖고 있는 DNA 조각으로 크기가 상대적으로 작고 스스로 복제할 수 있는 능력이 있어 클로닝할 때 유용한 벡터로 활용되고 있다. 숙주의 성장과 생식과정에 필수적이지는 않지만 종류에 따라 항생물질 등에 대한 저항성 유전자, 접합에 관여하는 유전자, 새로운 대사를 가능하게 하는 유전자들을 가지고 있어 숙주세포에 선택적 이점을 갖게 해주기도 한다.
플라스미드를 분리하는 방법을 매우 다양하게 개발되어 있으나 기본적인 원리는 플라스미드 DNA가 염색체 DNA에 비해 작으며 환상 DNA라는 특성을 이용하는 것이다. 알칼리성 용균(Alkaline lysis)방법은 1979년에 번보임(Birnboim)과 돌루(Dolu)등에 의해 대장균에서 플라스미드를 분리하는 것으로 개발된 이후 지금까지 사용되고 있는 방법이다. 세균을 높은 pH에서 강한 음이온 세정제인 SDS로 처리하여 세포벽을 깨고, 플라스미드 DNA를 상등액으로 유리시킨다.

<중 략>

실험에 사용된 시약과 과정에 대해 좀 더 알아보자면 alkaline lysis prep는 크게 세단계로 나눌 수 있다.
step.1.은 세포를 파괴하는 용해단계
- EDTA의 경우 세포벽의 intergrity를 유지하는 데 필수적인 calcium ion을 제거하여 세포벽이 군데군데 무너지게 한다. 이 때 glucose는 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지시켜 준다. 이 과정에서 실험상 vortex를 해야하는데 이때 세포가 완전히 깨지게 되면 chromosomal DNA가 잘게 깨지게 되어 plasmid DNA와 구분 할 수 없게 된다. 따라서 이렇게 세포를 유지시켜가면서 세포벽만 깨는 것이다.

참고자료

· 1. 유전학 실험서 / 한국유전학회 / 라이프 사이언스 / 2004 / P.123~ p.133
· 2. 유전공학의 이해 / 남상욱 외 1명 / 라이프 사이언스 / p.35 ~ p.36