Molecular Cloning of Dextransucrase gene from weisseria cibaria

소개

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목차

서론

재료 및 방법
Polymerase chain reaction(PCR) and Gel electrophoresis
T-Vecter Ligation And Bacterial Transformation
Preparation of Plasmid DNA by Alkaline Lysis with SDS
Restriction enzyme digestion and gel electrophoresis
DNA base analyse

고찰

본문내용

서론

Molecular Cloning of Dextransucrase gene from Weisseria cibaria 실험을 하기위해 Weisseria cibaria 에서 유래 한sucrose로부터dextran을생성하는 dextransucrasegene을PCR실험(Polymerase chain reaction의 원리를 알고 전기영동을 통해 DNA를 확인)과 TA cloning(vector인 plasmid에 DNA를 끼워넣기 위한 방법)실험을 통해 얻을 수 있으며 얻어진 gene의 DNA 염기분석을 통해 결과를 확인 할 수 있다.

재료 및 방법

Polymerase chain reaction(PCR) and Gel electrophoresis
PCR - Template DNA,Taq polymerase,
primer-F와 primer-R,dNTP,10X buffer,D.W
pipette을 이용하여 PCR전용 EP Tube에 용량이 큰 순서대로 넣어준다. D.W 26㎕를 넣고 10X buffer 5㎕를 넣어준후 dNTP 5㎕를 EP tube에 넣어준다. 그다음 PCR 실험에서 가장 중요한 Primer-F와 Primer-R를 각각 5㎕씩 넣어 준후 Template DNA를 2㎕넣고 Taq polymerase를 2㎕ 넣어 준다.
그리고 난후 PCR Thermal cycler standard를 사용 하여 약 2시간동안 26Cycle을 돌려준다.
① Denaturation- 94℃ 5 Min
94℃ 30 Sec
② Annealing- 58℃ 30 Sec
③ Extension- 72℃ 1 Min
72℃ 8 Min
DNA의 증폭 결과를 확인하기 위해 Gel electrophoresis를 실시한다. 1% Agarose Gel을 만들기 위해 Agarose 1g에 TBE buffer 100ml를 넣고 전자 렌지에 5분 정도 돌린후 ethidium bromide를 넣어준다.gel tray에 70% 정도 붓고 comb를 끼운 후 상온에서 굳혀준다.Tube에 D.W 7㎕넣고 PCR 산물 3㎕와 6x Loading dye 2㎕ 넣은후 잘 섞어 준다.

참고자료

· 없음