염색법

소개

미생물실험 레포트입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론
3. 재료 및 기구
4. 실험방법
5. 실험중 주의사항
6. 실험결과
7. 연습문제

본문내용

1. 실험 목적
미생물의 단순 염색, 감별 염색을 할 수 있어야 한다.
염색된 세균의 표본을 관찰한 후 균이 지닌 염색의 특성을 판독할 수 있어야 한다.


2. 실험 이론

◈ 염 색 법
1. 단순 염색 : 한 가지 염료로 균을 염색, 염색의 기전은 여러 가지 설이 있으며 그 기전을 이해하는데는 색소의 성격을 알아야 할 필요가 있다. 색소는 화학적으로 benzene환에 연결된 발색군(chromophore)과 조색군(auxochrome)을 함유한 유기 복합체라고 할 수 있다. Chromophore군은 색소의 발색 작용에, auxochrome는 전해질 분리에 각각 관여하는 작용을 하며 색소의 염기형성(salt-forming)을 담당하고 있다.
2. 감별 염색 : 균종에 따른 다른 염색성에 근거하여 균을 감별
1) 그람 염색 : 1차로 쓰이는 crystal violet을 건조, 고정된 세균 도말 표본에 가했을 때 Gram 양성균이나 Gram 음성균이 다같이 일단은 crystal violet 색에 착색된다. 이와 같은 현상은 색소의 염기군과 세포의 산성군 사이 일어나는 이온결합에 의한다. 시약 중의 iodine-potassium iodine 액은 매염제(mordant)의 구실을 하는데 Gram 양성 및 음성균 세포 내에서 색소와 작용하여 일종의 침체현상을 일으켜 색소의 부착을 촉진한다. 탈색제(decolorizer)는 Gram 음성균 세포에 착색된 crystal violet 색을 씻어 없애지만 Gram 양성균은 위 탈색제에 견딜 수 있어 crystal violettor을 유지하게 된다. 합리적으로 받아들여지고 있는 원리인 침투력 이론(permieability theory)에 의하면 세균 세포벽의 화학, 물리학적인 차이가 작용하는 것이라고 한다. Gram 양성균 세포벽은 두껍고 화학적으로 단순하여 주로 단백질과 교차 연결된 mucopeptide로 되어 있다. 따라서 탈색제로 쓴 sdkfzhdhf이 탈수 작용을 하여 Gram 양성 세포를 수축시켜 crystal violet의 유실을 감소시키기 때문에 violet 색으로 남는다. 한편 Gram 음성균 세포벽은 얇고 단백질 mucopeptide와 지질의 여러 가지 복합층으로 되어 이다. 알코올로 처리하면 지질(lipid)이 용해되면서 1차 색소도 함께 용해, 씻어 버린다. 이외에도 균체 내 탈색제 차단물질(magnesium ribonucleate)의 유무에 따른 염색설도 있다.

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4. 실험방법

◈ Simple staining
1. 청정한 슬라이드 뒷면에 유리용 색연필로 직경 1cm정도의 동그라미를 그린다.
2. 백금이를 엄지, 검지, 셋째 손가락 사이에 잡고 60° 각도로 불꽃에 넣어 백금선 부분을
가열한다.
3. 왼손에 잡은 시험관의 뚜껑을 백금이를 잡은 손의 새끼손가락과 넷째 손가락으로 돌려 빼고 시험관의 입언저리를 불꽃에 살짝 구은 후 백금이를 시험관 속에 넣어 균액을 떠낸다. 그 후 다시 시험관의 입언저리를 불에 굽고 뚜껑을 닫는다.
4. 백금이로 떠낸 균액 한 방울을 슬라이드의 동그라미 안에 가능한 한 얇게 골고루 편다.
5. 백금이를 가열 살균한다.
6. 도말된 표본을 공기 중에서 말린다.(시간이 오래 걸리면 알콜램프 불꽃 근처에서 말린다.)
7. 말린 도말 표본을 불꽃 사이로 3~4회 통과시켜서 균을 슬라이드에 고정시킨다.
8. 고정된 도말표본이 식은 후 methylene blue 염색액 한 방울을 도말 부위에 떨어드리고 30~60 S 동안 염색한다.
9. 염색액을 버리고 도말표본 뒷면에 약하게 수도물을 흘림으로써 서서히 염색액을 씻어낸다.
10. 흡수력이 큰 종이로 도말표본 위의 물기를 제거한다.
11. 유침유를 도말 표본위에 한 방울 놓고 유침 렌즈로 검경한다.

◈ Gram staining
1. 균의 도말 표본을 위와 같은 방법으로 만든다.
2. 균을 도말한 부위에 crystal violet용액을 1~2방울 가한 뒤 1분간 방치한 후 염색약을 버리고 슬라이드 뒷면에 물을 흘려보내서 씻어낸다.
3. Gram`s iodine 용액을 도말 부위에 가한 뒤 1분간 처리하고 물로 씻어낸다.

참고자료

· 없음