lowry, 로우리

소개

알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 Cu2+이온을 생성하는 Biruet반응 원리를 이용한 실험으로 식품 중의 단백질 함량을 파악하는 실험이다. ISP에서의 단백질 함량을 파악하고자 Lowry test를 실시한다.

목차

초록
서론
장/단점
목적
원리
장치
재료
방법
결과
고찰
문헌

본문내용

서론
Lowry법은 단백질 정량에 있어서 비교적 넓게 적용되기 때문에 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다.
2개 이상의 펩타이드 결합이 근접하여 존재할 때 강알칼리 상태에서 2가 구리이온(Cu2+)과 착염을 형성해 발색한다. 또한 amino acid 중 Tryptophan와 Tyrosine은 Folin reagent(Phosphomolybdic phosphotungstic acid)을 환원시켜 청색으로 발색한다. 이 발색반응을 이용해 단백질 및 펩타이드를 정량화한다. 이 두 아미노산의 함량은 단백질 종류에 따라 차이를 보이므로 1mg의 단백질에 대한 색의 강도가 일정하지 않다. 표준곡선을 결정하는데 사용한 단백질이 나타내는 색의 강도와 다를 수 있다. 감도는 10~200μ㎍ protein이다. 여러 단점이 존재하나 이 방법으로 단백질의 정제하는 과정에 단백질 함량변화를 측정하는데 유용하다고 할 수 있다.
정량을 위해서는 농도를 알고있는 단백질 표준 용액(Bovine serum albumin)을 농도별로 만들어 시료와 동일한 조건에서 발색시킨다. 발색의 강도는 단백질의 농도에 비례하므로 시료의 발색 정도와 단백질 표준 용액의 발색 정도를 비교하여 시료에 들어있는 단백질의 양을 결정한다.

단점
이 분석법은 간단하게 시료를 회수할 수 있으나 다른 흡광물질에 의한 방해와 단백질 고유의 흡광치를 결정해야 한다는 것이 단점이다. 그리고 280nm에서 핵산의 흡광도는 단백질의 10배 가량되므로 미량의 핵산에 의해 흡광도가 영향을 받을 수 있다. 반응을 방해하는 물질이 다수 존재하며 반응이 느리고, 일부 reagent가 불안정하다. 또한 비가역 변성반응을 일으키므로 시료의 재사용이 불가능하다는 단점이 있다.
장점
Lowry 단백질 정량 분석법은 용액에 포함된 단백질은 물론 건조시료에도 이용할 수 있는 장점이 있다. 이 정량법은 5㎍/㎖의 단백질을 정량할 수 있는 매우 민감성이 높은 반응이다. 따라서 신뢰성이 있으며 단백질 종류에 따른 차이가 적은 것이 장점이다.

참고자료

· 채수규 외 5인, 2004, 표준 식품 분석학(이론 및 실험), p..20~25
· 한국생화학회, 1997, 실험생화학, p.53~72, 3판, 탐구당, 서울
· 민철기&강창수, 2006, 생물학실험서, p.31~36, 2판, 라이프사이언스, 서울
· http://blog.naver.com/ckurapika0?Redirect=Log&logNo=10072980469
· http://100.naver.com/100.nhn?docid=20580
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