RNA 분리 및 농도측정과 전기영동 레포트

소개

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목차

1. 주제
2. 재료 및 기구
3. 실험 목적 및 원리
4. 실험 방법
5. 실험 결과
5. 이 론
6. 고 찰
7. 참고문헌

본문내용

200ul chloroform을 넣고 15초 동안 invert mixing하고 5분간 ice에서 incubation 한 후 12000~13000rpm 으로 15분간 원심분리한다.
Centrifuge 하는 동안 새 e.p tube에 labeling을 한다.
Trizol ? protein ? water(RNA) 층으로 3단 분리 되면 water층만 따서 e.p tube에 옮긴다.
(ex. 약 600ul ? e.p tube가 흔들리지 않게 주의)
3에서 취한 상등액의 부피만큼 동량의 isopropanol을 넣어준다.
(Water층과 isopropanol이 1:1 volume이 되도록 함)
Invert mixing 해주고 30분 동안 ice incubation 하거나 실온에서 15분간 incubation한다.
12000~13000rpm에서 15분간 원심 분리한다.
Pellet을 건드리지 않고 상층액을 버린다.
DEPC(diethyl pyrocarbonate)로 희석된 70% ethanol 1ml를 넣고 7500rpm에서 7분간 원심 분리한다. -washing
(증류수에는 RNase가 존재 할 수 있으므로 DEPC를 사용함)
70%의 Ethanol을 버리고 1번 더 2분 정도 Centrifuge를 하여 남은 Ethanol을 제거한다.
DEPC 20ul을 넣어 -70°C에서 보관한다.
RNA 농도 측정 (UV-vis spectrophotometer 이용)
Cuvette에 DEPC 50ul를 넣어 흡광도를 측정한다. ( volume 50ul) - Blank
Cuvette에 분리 된 RNA sample 5ul과 DEPC 45ul를 넣고 흡광도를 측정한다. ( total volume 50ul) ? sample (10배 희석)
RNA electrophoresis
<1% agarose gel 30ml 제조>
삼각플라스크에 agarose 0.3g과 1X TAE 용액 30ml를 넣고 microwave oven을 이용하여 알갱이가 없도록 완전히 용해시킨다.
(랩을 씌우고 구멍을 뚫은 채로 녹인다)
용액을 50-60℃ 정도로 충분히 식힌 후 comb를 꽂은 gel plate에 부어준다.
(거품이 생겼다면 plate의 아래로 모아 제거한다)
Gel이 굳도록 20-30분간 기다린 후 gel이 굳으면 comb를 조심스럽게 뽑는다.
Gel을 전기영동 tank에 (-)charge에서 (+)charge로 loading 할 수 있도록 넣고 1X TAE buffer를 채워준다.

참고자료

· 한국생화학회, 실험 생화학, 탐구당, 1997.
· 한국식품영양과학회, 식품영양실험핸드북, 효일 도서 출판사, 2000.
· 김현숙 외, 최신 영양생화학 실험, 교문사, 2005.
· 김정국 외, 유전자 클로닝과 RNA 분석 입문서, 월드사이언스, 2006.
· 한국유전학회 실험서 집필위원회, 유전학실험서, 라이프사이언스, 2004.