PBS buffer 조제

소개

A+자료, 생화학실험 PBS buffer 제조 결과 리포트, 사설자료X, 실험목적 준비 시약 과정 주의사항 결과 처리 토의 참고문서 철저

목차

1. Title PBS buffer 조제
2. Date 2011년 8월 23일 화요일
3. Name Coworker
4. Principle & Object
5. Material
6. Procedure
7. Discussion

본문내용

생체 내 이온은 NaCl이 대표적이지만 KCl이 그 다음으로 중요한 이온이다. 따라서 일정비율로 NaCl만이 아니라 KCl도 넣어준다. NaCl 137 mM, KCl 2.7 mM
또한 인산완충용액은 monobasic phosphate와 dibasic phosphate를 넣어야 완충용액으로서 기능을 한다. 따라서 먼저 넣어준 양이온에 맞추어 Na2HPO4 10mM, KH2PO4 1.76mM 넣는다.

# 제조
- buffer capacity
Phosphate buffer 제조 시 해리 단계가 다른 두 물질을 혼합하여주는데, 예를 들어 sodium phosphate buffer는 sodium phosphate monobasic(NaH2PO4) 과 dibasic(Na2HPO4)를, potassium phosphate buffer는 potassium phosphate monobasic(KH2PO4) 과 dibasic( K2HPO4) 을 섞어서 제조한다.
그러나 PBS 는 특이하게도, sodium phosphate dibasic(Na2HPO4)과 potassium phosphate monobasic (KH2PO4)을 넣어, buffering capacity를 유지한다.

- pH
PBS buffer는 희석농도에 따라 pH가 민감하게 변화함. 10x PBS를 만들 때 Na2HPO4, KH2PO4, NaCl, KCl을 계산한 양만큼 넣어 만들면 pH 값이 ~6.8 정도가 나오는 것이 정상이며, 보통 1x로 희석했을 때, pH7.4가 되게 되어 별도의 조정이 필요 없다. 정해진 recipe에 맞추어 조제하고 난 후에도 pH조정이 필요한 경우, 낮은 경우 NaOH를 높은 경우 HCl을 사용하여 맞춘다.
원래 Buffer pH조정이 필요한 경우, 산과 염기 중 양이 많은 것을 먼저 첨가하고 나머지 첨가량을 조절하면서 pH를 맞춘다.

- 오염
10X는 염 농도가 높아 멸균하지 않아도 contamination의 우려가 없으나, 1 X 제품은 상온에서 며칠 지나면 쉽게 contamination이 일어남. (autoclave는 1X로 희석한 후 시행함)

- antibiotics(항생제)
filtering만으론 오염을 100% 막을 순 없어 예방차원에서 사용해도 무방함.

참고자료

· 없음