(세포생물학) genomic DNA 분리

소개

세포생물학 실험레포트 입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Materials
Ⅲ. Method
Ⅳ. Result (생략)
Ⅴ. Discussion

본문내용

Ⅰ. Introduction
genomic DNA는 긴 이중사슬(107~108)로서 세포의 핵 내에 존재하고 있다. genomic DNA의 추출에 있어서는 어떤 방법으로 파손시키지 않고 추출해서 어떻게 정제도가 높은 것을 얻는지가 중요하며, 이러한 요건을 만족시키는지의 여부에 의해 그 후의 DNA 분석의 성부가 결정된다.
genomic DNA의 추출은 먼저 세포를 용해하고 세포내의 DNA를 가용화한다. 이어서 DNA에 결합하고 있는 히스톤 등의 단백질을 프로테나아제 K라는 단백분해효소를 이용하여 제거한다. 그리고 유기용매인 페놀 클로로포름을 DNA 용액에 첨가하여 DNA 용액 중의 단백질을 변성시켜서 제거한다. 클로로포름은 지질제거에도 효과적이다. 그리고 또 RNA 분해효소인 RNase를 사용하여 DNA 용액 중에 혼재하고 있는 RNA를 분해, 제거한다. 그 후 사기 페놀, 클로로포름 처리한 후 DNA 용액 중에 초산나트륨과 에탄올을 가하여 냉각시키면 DNA는 침전되고(에탄올 침전법) 원심분리하면 pellet으로 회수할 수 있다. 이렇게 DNA를 추출의 조작을 제 단백이라는 것이 된다. 더욱이 DNA 추출을 통해서 DNA에 물리적인 절단이 되지 않도록 하는 것이 중요하다.

Ⅱ. Materials
- Extraction buffer(100ml) : CTAB(C19H42NBr), EDTA, Tris-HCl(pH8.0), Nacl, polyvinylpyrrolidine(PVP-40), Ascorbic acid
- RNase A(20mg/ml), Chlroform, Isopropanol, 70% EtOH, d.w

참고자료

· 박용호 외6인/동물유전공학/선진문화사/1996/p.90-95
· 한국분자생물학회/분자생물학/아카데미서적/1998/p.17
· Takeshi Uozumi/유전공학개론/청문각/2002/p.41-42