플라스미드 접합 및 형질전환

소개

플라스미드 접합 및 형질전환 실험에 대한 보고서.
논문 형식을 취함으로써 전문성을 극대화 함.

목차

1. 서론
1.1. Ligation
1.2. Vector
1.3. Competent cell
1.4. Transformation
1.5. Blue-White selection

2. 실험
2.1. Ligation
2.2. Competent cell 제조
2.3. Transformation
2.4. Plasmid isolation
2.5. Plasmid restriction
2.6. 0.8% agarose gel electrophoresis

3. 결과
3.1. Blue-White selection
3.2. Plasmid isolation 및 restriction

4. 결론
4.1. Plasmid ligation 및 transformation
4.2. Plasmid isolation 및 restriction

본문내용

플라스미드 접합 및 형질전환


Plasmid ligation and transformation


Key Words: DNA fragment, PstI, plasmid, gene cloning, pGEM-T-Easy-DXS, ligation, competent cell, competence, transformation
Abstract
목적으로 하는 DNA나 RNA 단편을 insert로 하여 vector에 삽입·접합하는 과정을 ligation이라 한다. LIgation은 발현 시키고자 하는 codon을 보유하는 유전자만을 restriction 하였을 때 그것의 생물전환 및 cloning 등의 목적으로 다른 미생물로의 transformation 전 과정으로 실행되는 과정이다. Ligation은 반드시 insert와 vector를 필요로 하며 insert의 3′-overhang nucleotide A의 상보적인 결합력을 이용하여 3′-overhang nucleotide T를 가지고 있는 T-vector를 주로 사용한다. Ligation을 실행한 plasmid는 transformation을 목적으로 하는 미생물의 cell을 competent cell로 전환시키고 plasmid와 competent cell을 한 곳에 담아 42℃에서 45초간 heat shock를 주어 plasmid를 cell 내부로 competence 시켜 하루 정도 배양하는 것으로 transformation을 완료하게 된다.

참고자료

· Ligation, 한국산업기술대학교, 생명화학공학과, 생물공학실험 발표자료, 최광훈 외 3명 作
· Competent Cell, 한국산업기술대학교, 생명화학공학과, 생물공학실험 발표자료, 강수지 외 3명 作
· Transformation, 한국산업기술대학교, 생명화학공학과, 생물공학실험 발표자료, 김화연 외 1명 作